植物生理实验七 电子传递实验 Dai.ppt

实验七 除草剂DCMU对光合电子传递 的抑制作用 一、实验目的 掌握光合作用过程中电子传递的途径、光合电子传递抑制剂的作用原理，了解叶绿素荧光技术在光合作用研究中的应用。 激发态的命运 放热 发射荧光与磷光 色素分子间的能量传递 光化学反应 二、实验原理 光合膜上的电子传递概况 DCMU 3ps 250-300ps 250-300μs DCMU能与D1蛋白的QB位点结合，使得 QB 不能与D1蛋白结合，从而阻断电子从QA向QB的传递，导致照光后QA-的积累，荧光迅速达到最大。 快速荧光诱导动力学曲线 叶绿素荧光 5、活体叶绿素荧光的应用 1931年，Kautsky发现叶绿素荧光现象并将其与光合作用联系起来。此后，人们对叶绿素荧光诱导现象进行了广泛而深入的研究，并逐步形成了光合作用的荧光诱导理论，被广泛应用于光合作用研究。由于叶绿素荧光技术具有测量灵敏，对植物无伤害的优点，成为光合作用的有效探针，广泛应用到植物生态学，农学，林学，水生生物学和环境科学等领域。 PEA工作原理 当暗适应的植物叶片被植物效率分析仪Handy PEA提供的激发光激发后，叶片叶绿素发出荧光，荧光被具有高分辨率的监测器所记录，该监测器每秒钟可以记录10万次荧光踪迹数据，把叶绿素荧光随时间快速变化的曲线（O J I P 荧光诱导曲线）准确记录下来，仪器通过分析叶绿素荧光诱导动力学曲线，反映光合机构PSII的光化学活性。 PEA工作原理 PAM（pulse amplitude modulation）荧光仪 采用调制技术，即用于激发荧光的测量光具有一定的调制频率，检测器只记录与测量光同频的荧光，因此PAM荧光仪允许测量背景光很强时的任何生理状态下的荧光，被广泛应用于野外操作。 FIRe 荧光诱导/弛豫测量系统工作原理 二、器材与试剂 1.实验试剂 DCMU溶液 浓度为5×10-7M、5×10-6M、5×10-5M和1.0×10-3M 2.实验仪器 植物效率分析仪（Plant Efficiency Analyser，PEA) 可调式移液器（20μl 和1ml各一支） 3.实验材料 铜绿微囊藻 太湖蓝藻水华 Microcystis 三、实验步骤 取1ml藻样到PEA样品杯中。 另取4份1ml的藻样，暗适应7 min，后在暗处分别加入20μl 5×10-7M、5×10-6M、5×10-5M 、1.0×10-3M的DCMU，以及空白对照（乙醇）, 继续暗适应3 min。 设置PEA参数：光强，100%；测定时间，1s。 用PEA测定不同浓度DCMU处理藻样的快速荧光诱导动力学曲线。 将PEA与电脑连接，导出测定结果；通过Biolyzer3软件获取快速荧光诱导动力学曲线各时刻荧光原始数据。 以时间对数为横轴，荧光值为纵轴，通过Origin 6.0软件作图。 四、注意事项 1. PEA传递光信号的光纤务必保持伸展状态，切不可对折。 2. 移动PEA的荧光探头时需轻拿轻放，内有 6个发光二极管，禁止碰摔。 3. 实验过程中小心操作，不要让液体进入仪器。 五、实验作业 1. 实验测量之前藻细胞为什么要进行暗适应？ 2. 实验过程中为什么要向对照样品中加入20μL 乙醇？ 3 . 经DCMU处理后为什么藻细胞的荧光上升速率会加快？ * *