实验室检(监)测在健康养殖中的应用.pptVIP

实验室检（监）测在健康养殖中的应用 王恩峰 2015年2月 1、病料组织 全面：脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结、扁桃体，肠道与脑单独保存 伪狂犬必须有脑，最好是小脑 药敏及细菌分离禁止冷冻病料 病理切片现场固定，避免组织自溶，2-3cm 切记病料不要太大，尤其肝肺，选病变明显部位 各样品间不要污染，做好标记 流产胎儿带脐带，特别是日龄小的 有客户自己解剖，喉头不是扁桃体，注意区分 2、血液 前腔静脉（小猪）或耳缘静脉（大猪）采血2-3ml，斜面放置待血液凝固后尽快送检 冷藏不冷冻，送检时切勿剧烈震荡血样，溶血、腐败 编号清晰，注明猪群类别及检测项目 尽量附免疫程序，便于分析 如果运输路途较远，血液凝固析出血清后，收集血清送检，送检时在箱内放冰袋或冰冻矿泉水瓶。 3、水样 无菌取500ml水后放至灭菌玻璃瓶或刚开封的矿泉水瓶（倒掉矿泉水）中，送检时在箱内放冰袋。 4、饲料或饲料原料 取有代表性样品，放入样品袋或牛皮纸袋中直接送检。 CSFV与BVDV是病毒中最为类似的两种病毒，所以猪瘟抗体ELISA试剂盒要与BVDV无交叉反应 BVDV：牛病毒性腹泻病毒（孙龙飞） BVDV可以造成猪瘟检测的假阳性（IDEXX无交叉反应） 从猪群中分离到BVDV病毒证实了猪群存在感染 BVDV在猪群中可以引起类似猪瘟的症状和病变 一、CSFV检测 监测用途： 母源抗体的监控，确定首免日龄 评估免疫后抗体水平 免疫程序评估及调整 1、引种检测: 后备公猪/后备母猪引进时(4-6月龄) CSFVAb: 随机采样CSFVAb Blocking＞50% CV40% ，对Blocking50% 及时进行免疫 2、公猪检测: 后备公猪/现役公猪 全群检测，Blocking 50%需要及时加强免疫，检测频率:2次/ 年 3、母猪检测: 分群:怀孕母猪/产房母猪 CSFVAb Blocking 50%,CV40%为免疫合格，检测频 率:4次/ 年(30样本/次/群) 4、商品猪检测: 产房乳猪/保育-育肥猪 CSFVAb Blocking 50%,CV40%为免疫合格，检测频 率:4次/ 年(30样本/次/群) 二、PRRS在规模化猪场疫病中的地位和防控 规模化猪场的PRRSV危害及现状 PRRS的实验室检测能取得什么基本信息 如何评价免疫的效果 定期常规检测的目的意义 健康管理检测方案在生产中的应用 危害： 母猪繁殖性能低下（母猪产后发情不正常；非生产天数较长；受胎率低，返情率高，分娩率低，产活仔数低； 无预兆性、反复发生在产房的初生仔猪腹泻（PED）； 保育猪间歇性难养（发热、衰竭、呼吸困难、死亡率增高）； 生长育肥猪死亡率增加； 猪瘟抗体水平低下、口蹄疫散发； 种猪伪狂犬病阳性率骤增（甚至出现临床症状）； 在所有感染、发病群体病原的检测中，PRRSV是检出率最高的病原。 1、规模化猪场的PRRSV危害及现状 现状： 规模化猪场PRRSV阳性普遍，且大部分持续性感染； 目前我国完全经典PRRSV感染的阳性猪场只是极少数，HP-PRRSV变异株阳性场越来越多或成为主导性毒株； PRRS的防控始终遭遇瓶颈（虽然采用了分点式生产、全进全出、药物、PRRS疫苗免疫、支原体和圆环病毒免疫、消毒等能想到的方法无所不用其极）； 依赖PRRS疫苗免疫的防控手段，目前不断面临新的问题和挑战。 ? ? 2、PRRS的实验室检测能取得什么基本信息 2014年PRRSV流行毒株分子流行病学分析： 2014年分离的毒株，除极少数属于第2亚群，其余98%以上均属于第4亚群，具有与高致病性毒株相同的分子特征； 分离毒株的变异状况 核苷酸、氨基酸的变异与2011-2013年相比有逐步加快的趋势，核苷酸、氨基酸同源性分别下降了0.5~1%、0.5% ，与经典毒株的差异逐渐在拉大； 尤其是部分毒株糖基化位点有“减少并向前移位”的趋势，说明病毒有结构性变异的风险。在生物安全管理混乱、群体流动性大、生产性能持续不稳定的猪群，PRRS毒株变异情况越快且复杂。 ? 病毒 淋巴器官 肺脏 其他组织 24小时侵染所有的淋巴组织和肺脏 7-14天血清、淋巴结的病毒滴度达到高峰 病毒滴度迅速增加 在分化良好的单核细胞中复制 （1）抗体与PRRSV形成免疫复合物， 借助细胞表面的FC受体与巨嗜 细胞结合，增加PRRSV进入巨 嗜细胞的机会。 （2）分化细胞：促进肺泡巨噬细胞 和肺血管内巨噬细胞的复制。 ? 毒株毒力 ? 个体免疫能力 ? 外部因素 进入局部的易感巨噬细胞内复制 血清学稳定 12小时