植物细胞及组织培养.ppt

§4-1 花药培养 一. 花药培养的基本概念 指应用植物细胞具有全能性的原理，把花粉发育到 一定阶段的花药，接种到人工培养基上，以改变花药 内花粉粒的发育途径，形成花粉胚或花粉愈伤组织， 进而发育为完整植株的系统技术。 ●基本特点：花药中的花粉（小孢子)具有单倍性， 花药培养能产生较大数量的单倍体或自然加倍成纯合 二倍体植株。 ●在作物育种中的意义： (1)缩短育种进程 纯合二倍体花粉植株没有分离现象，一般只需三 年时间就能获得性状稳定的后代。 (2) 高效选择性 配子选择：选择某一基因型的概率是（1/2）n；而 从F2 群体中选择一基因型的概率是（1/2）2n (n表 示参与重组的基因数)从理论上花粉单倍体育种的效 率要比常规杂交育种高 2n倍。 (3)辅助获得亚种或种间杂种 进行远缘杂交的杂种胚培养(挽救)； (4) 便于目标性状的筛选 无显性性状掩盖隐性性状的干扰，避免杂种后代 性状分离，便利于隐性突变体的筛选。 二.花药培养的基本方法 1.花药培养产生花粉植株的一般途径： 花药中的花粉粒 再生植株(烟草、曼陀罗等)； 胚状体 愈伤组织 再生植株(水稻、玉米等)。 ●两种途径并无绝对界限，主要取决于培养基中的激素种类 及其浓度配比。 2. 花药培养的一般方法 1) 供试材料的选择 ① 材料的基因型 ●水稻：梗稻花药愈伤组织平均诱导频率在10%左 右，籼稻的平均诱导频率只有1%-2%。 而且证明，花药培养力是可以遗传的，且为显性或超 显性，高培养力作母本时作用大于父本。 ●小麦：“欧柔4号”、“西阿诺”和“小偃759”等品 种，花药愈伤组织的诱导频率可达40%以上；“农大 139”、“农大311”花药培养迄今没有成功。 小麦种间杂种往往比纯种更易产生花药愈伤组织 ●烟草：属中的绝大多数种的花药极易产生花粉 植株，但郎氏烟草(N.LsdorHii)花粉植株的诱导率极 低。 ②材料的生理状况 ● Sunderland的研究发现，在氮饥饿状态下栽培的 植株，其花药的诱导率以及每个花药形成花粉胚的平 均产量,均比高施氮肥的植株的花药要高得多。 ● Keller等研究发现，在白天16h光照、20℃，夜间 15℃的人工气候室生长条件下, 两个油菜(B.compestds) 杂种花药的胚状体发生频率分别为17.6%和22.3%；而 大田栽培的分别只有9.8%和4.4%。 ●黄德俐等(1982)报道，水稻在高氮和高温下， 比在正常条件下的诱导频率低，而且白化苗的比例 明显增高。 ●王培田等（1980）研究表明：田间早春播种的 小麦冬性品种花药离体培养产生愈伤组织频率为 4.99%，绿苗分化率为21.3%田间适时秋播愈伤组 织产生频率为2.82%,绿苗分化率仅为17.3%。 可见,不适宜的环境条件有利于愈伤组织频的诱导 ③花粉发育时期 ●并不是任何时期的花粉都可以被培养产生愈伤组 织或胚状体，只有花粉发育到一定时期，对离体的刺 激才最敏感。花药培养的最佳时期通常是： 曼陀罗属、烟草属、水稻：单核中期至单核晚期； 小麦和玉米：单核中期； 大麦：单核晚期； 天竺葵：四分体时期； 番茄：减数分裂中期； 大多数植物：单核中期至晚期。 ◆最佳培养时期的确定方法： 制片镜检花粉粒发育时期，椐此确定相对应的形 态学特征。 检查花粉的发育时期，最常用的有醋酸洋红或I- KI溶液染色制片方法，对与细胞核较难染色的 植物花粉可需采用焙花青一络矾染色法，可使花粉 细胞核染成蓝黑色。 2) 材料的处理 ①试验材料的预处理：能够显著提高花药培养的诱 导率。通常采用的方法是低温预处理： 毛叶曼陀罗花蕾：将其插在水中于3℃下保存48h； 烟草：7～9℃，7～14d为宜； 番茄：6～8℃，8～12d； 水稻：10℃，2～14d； 小麦、黑麦、杨属植物：1～3℃，2～20d； 大麦和玉米：7℃，7～14d。 ②其他处理：也可明显地提高花药培养的效率： 将花蕾、幼穗或花药直接离心； 将花药置于高浓度糖溶液中进行短时间(6～8min) 浸泡处理； 用乙烯利喷施植株(王敬驹等，1974)。 ●低温处理提高花粉胚胎发生