玉米秸秆蛋白发酵饲料木质纤维素酶高产菌株的选育和应用.pdf

III 万方数据 谨以此论文献给我敬爱的老师、家人及我亲爱的朋友 陈英连 I 万方数据 玉米秸秆蛋白发酵饲料木质纤维素酶高产菌株的选育 及应用 摘 要 世界上纤维原料资源丰富，将纤维资源转化后可实现生产酒精、单细胞蛋白 等物质的目的。这不仅充分利用了自然资源，而且防止了由于纤维原料的丢弃产 生的污染。其中纤维原料转化是实现纤维原料合理化利用的重要步骤。纤维原料 的转化包括纤维原料的预处理和纤维素酶的酶解。本文主要从纤维原料秸秆的预 处理及纤维素酶的生产两个重要方面进行了探讨。 首先通过单因素实验确定了玉米秸秆高压蒸煮锅中蒸煮的最佳预处理条件： 用碱量为14%、固液比为1:7、保温温度为130℃1h＋140℃1h，该预处理条件下 处理后的玉米秸秆其纸浆卡伯值出现最低，残碱和纸浆得率也较为合理。此时其 卡伯值为12.43，制浆得率为56.7% 。随后利用购买的纤维素酶及木聚糖酶对预处 理后的秸秆进行酶解，进一步确定了上述最佳预处理条件。利用最优预处理秸秆 进行酶解，通过一系列实验确定了最佳酶解条件：三角瓶中装入100mL浆浓度为 3%的预处理秸秆，纤维素酶用量为100U/g，木聚糖酶用量为600 U/g ，酶解pH值 为4.8 ，48 ℃恒温培养箱中摇瓶酶解72h 。此时酶解液中还原糖含量积累达到最大， 为25.6mg/mL 。 以实验室保藏的绿色木霉为出发菌株，通过两次紫外与两次DES 的交替诱 变对绿色木霉的出发菌株进行了诱变筛选。在以醋酸纤维素钠为唯一碳源的刚果 红培养基上筛选出一株透明圈较大的菌株 Hc=2.1 ，经多次复筛后，得到了一株 生长较好酶活较高的突变株，编号T.viride8140UEUE4-80，其纤维素酶活达到了 22.79U/mL、FDA 酶活达到了 2.56U/mL、木聚糖酶活达到了 38.09U/mL，分别 比原始菌株提高了2 倍、1.5 倍和 1.3 倍。对突变株的传代稳定性进行了研究， 得到的突变株产酶稳定性良好，酶活下降极少，说明获得的突变株 II 万方数据 T.viride8140UEUE4-80 可以用来进行后续培养。 对绿色木霉突变株Trichoderma viride8140UEUE4-80 的液态产酶培养基及培 养条件进行了优化。实验通过对菌株液态产酶培养基中的碳源、氮源、pH值、 金属离子及表面活性剂的研究，确定了最佳产酶培养基中各成分及其含量： 1000mL营养盐成分：(NH )SO 2.0g/L 、KH PO 2.0g/L 、Urea 0.3g/L 、Peptone 4 4 2 4 0.75g/L 、CaCl 0.3g/L 、MgSO 0.3g/L 、FeSO ﹒7H O 5.0mg/L 、MnSO ﹒H O 2 4 4 2 4 2 1.6mg/L、ZnSO ﹒7H O 1.4mg/L、CoCl 2.0mg/L，微晶纤维素10g/L，麸皮10g/L， 4 2 2 吐温-80 2mL/L，pH 6 。实验通