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发育相关基因的功能 研究—RNA 干扰实验/过表达 转基因动物-----基因敲除 完全剔除某一基因（功能丧失的突变）在小鼠、果蝇、斑马鱼和线虫等模式动物中已开展这类研究 基因功能研究----转基因动物 3、显微注射技术 是指在高倍倒置显微镜下，利用显微操作器，控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置，用来进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。 应用： 转基因/基因敲除动物的制备（基因打靶载体转入ES细胞）； 核移植技术； DNA/RNA/蛋白质的细胞内注入 主要优点1. 体积小(0.6cm)，易于繁殖(30代）；2. 产卵力强；3. 性成熟短(10d)；4. 易于遗传操作： 如诱变；5. 基因组序列已全 部测出 (Science,  Mar. 24, 2000)。(120Mb encodes 13,601 proteins) 1. Drosophila melanogaster: Insect model Sydney Brenner John Sulston Robert Horvitz 2、Caenorhabditis elegans: Worm model 主要优点1. 易于养殖：成虫 体长1mm，易冷 冻保存；2. 性成熟短：2.5-3 天，两种成虫；3. 细胞数量少，谱 系清楚；4. 易于诱变；5. 基因组序列已全部测出 (Science, Dec. 11, 1998)。(97MB encodes 19,099 proteins.) RNA induced silencing complex  中国在重要科学领域缺席反映的科技体制和文化问题———诺贝尔奖引发的思考 中国科技文化中的非科学因素 (二)、Vertebrate Models 1. Xenopus laevis: Amphibian model 主要优点1. 性成熟短； 2. 卵体大，易于操作；3. 抗感染力强，易于组织移植； 1. Xenopus laevis and Xenopus tropicalis  主要优点1. 体积小，易于饲  养殖；2. 产卵力强；3. 性成熟短；4. 易于遗传操作： 如诱变；5. 体外受精和发育，易于观察；6. 基因组序列已全 部测出。 2. Danio rerio (zebrafish) 3. Mus musculus (Mouse) urchin 4. Gallus gallus (Chicken) 鸡基因组图谱的建立 　　2004年，由中国、英国、瑞典、荷兰、德国和美国科学家组成的联合研究小组，利用从国际基因组计划获得的基因组序列原始数据，通过生物信息学方法，对红原鸡基因组和现代生产鸡种基因组作对照研究，寻找优良生产鸡种的基因组多态性特征，构建优良生产鸡种基因组的分子标记图谱。　　后来，6国科学家组成的联合研究小组宣布绘成一张鸡的遗传差异图谱，即鸡基因组多态图谱。这张图谱以红原鸡基因组序列草图为参考框架，分别对来自英国的肉鸡、瑞典的蛋鸡和中国的乌鸡的基因组进行了测序分析，并在此基础上识别出约200万个遗传差异，其中绝大多数为单核苷酸多态性位点。 其他具有潜力的模式动物 Amphioxus “最后的马希坎人” “在所有已灭绝动物中惟有文昌鱼能使我们勾画出志留纪最早的脊椎动物祖先” “文昌鱼的发现使人们看到了5亿年前脊椎动物的模样” “文昌鱼是伟大的发现，它提供了指示脊椎动物起源的钥匙” 作为模式生物必备条件： 生理特征能够代表生物界的某一大类群； 容易获得并易于在实验室内饲养繁殖； 容易进行实验操作,特别是遗传学分析。 发育生物学实验方法和技术 1、 在试管中分析发育：体外授精和胚胎移植 2、细胞谱系研究—发育命运图谱的绘制 方法一：标记法—活体染料染色法 方法二：细胞移植法 寻找与发育有关的基因（经典遗传学） 差式筛选技术（differential screening）：分离不同发育阶段或身体各部分的mRNA，查明为发育阶段或身体部分独特的基因，进行后续研究。 Northern blot RT-PCR in situ hybridization 发育相关基因的功能 研究----------- 基因表达 Northern blot 探针的制备 探针效率的检测 Total RNA的提取 琼脂糖凝胶电泳 转膜 杂交 合适的探针浓度 加入探针 Northern blot 探针的制备 探针效率的检测 Total RNA的提取 琼脂糖凝胶电泳 转膜 杂交 合适的探针浓度 加入探针 显色 抗体孵育