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第三章 蛋白质及酶工程 本章主要内容： 第一节 概述 第二节 基因诱变技术 第三节 蛋白质的改造 第一节 概述 2.1.2 蛋白质工程的概念 蛋白质工程（Protein Engineering）是在对蛋白质的氨基酸序列、结构和功能进行理化及生物分析的基础上，采用基因工程技术对蛋白质进行修饰、改造以提升其功能效率，甚至创造出新的功能蛋白质的技术。 结构分析: X-射线晶体衍射技术 核磁共振（NMR） 蛋白质结构预测与分子设计： 根据未知蛋白质氨基酸一级结构序列分析，利用计算机信息技术，比较同源蛋白质的结构，按分子动力学、分子力学原理和算法，建立蛋白质的立体模型，并依据结构与功能关系研究成果，对蛋白质分子进行合理化改进设计。 蛋白质的分子量及等电点 用DNA Tool 5.1软件分析了Elymus sibiricus ATPase α亚基的分子量和等电点，推测蛋白质的分子量为55.5 kDa，等电点为6.22。 蛋白质的疏水区预测 蛋白质的修饰位点分析 蛋白质二级结构分析 蛋白质三级结构推测及保守结构域分析 蛋白质三级结构推测及保守结构域分析 低温胁迫不同时段atpA基因表达水平的RNA印迹结果 第二节 基因诱变技术 诱变技术 物理诱变： 化学诱变: 基因定向诱变： 第三节 蛋白质的改造 2.3.1蛋白质的定点改造 酶活性、稳定性、最适PH、特异性 药品的改造：白细胞介素2的半胱胺酸变为丝氨酸或丙氨酸，活性增强，稳定性提高。 2.3.2其他改造方法：四级结构改造、限制性内切酶的改造 第四节 酶工程 4.1概念 4.2酶的生产 4.3酶的固定化技术 4.4酶反应器 4.5生物传感器 4.1概念 4.1.1酶学基础 酶是一种生物大分子,主要是蛋白质,它能催化有机体各种生物化学反应,使新陈代谢活动得以有序地进行 酶的特性：? 高效性,专一性,可控性 影响酶活性的因素：?温度、pH、底物与产物浓度、变构作用 4.2酶的生产 4.2.1酶的微生物发酵生产 微生物产酶的优点：产量高，活性高；容易培养；微生物酶类齐全，易改造。 生产方法与培养基。 提高酶产量的措施：添加诱导物；降低阻遏物浓度；使用表面活性剂；添加产酶促进剂。 4.4 酶反应器 利用酶进行催化反应加工物料的容器即酶反应器 求职应注意的礼仪 求职时最礼貌的修饰是淡妆 面试时最关键的神情是郑重 无论站还是坐，不能摇动和抖动 对话时目光不能游弋不定 要控制小动作 不要为掩饰紧张情绪而散淡 最优雅的礼仪修养是体现自然 以一种修养面对两种结果 必须首先学会面对的一种结果----被拒绝 仍然感谢这次机会，因为被拒绝是面试后的两种结果之一。 被拒绝是招聘单位对我们综合考虑的结果，因为我们最关心的是自己什么地方与用人要求不一致，而不仅仅是面试中的表现。 不要欺骗自己，说“我本来就不想去”等等。 认真考虑是否有必要再做努力。 必须学会欣然面对的一种结果----被接纳 以具体的形式感谢招聘单位的接纳，如邮件、短信 考虑怎样使自己的知识能力更适应工作需要 把走进工作岗位当作职业生涯的重要的第一步，认真思考如何为以后的发展开好头。 Thank you 4.1.2酶工程（Enzyme Engineering） 是从应用的目的出发研究酶、应用酶的特异性催化功能，并通过工程化将相应原料转化成有用物质的技术。 酶工程主要有以下几个方面的研究内容： ①酶的分离、提纯、大批量生产及新酶和酶的应用开发； ②酶和细胞的固定化及酶反应器的研究（包括酶传感器、反应检测等）； ③酶生产中基因工程技术的应用及遗传修饰酶（突变酶）的研究； ④酶的分子改造与化学修饰、以及酶的结构与功能之间关系的研究 ⑤有机相中酶反应的研究； ⑥酶的抑制剂、激活剂开发及应用研究； ⑦抗体酶、核酸酶的研究； ⑧模拟酶、合成酶及酶分子的人工设计、合成的研究。 4.2.2酶的分离纯化 细胞收集、破碎 溶剂抽提 浓缩 过滤 离心 干燥 步骤： 纯化精制：离心、透析、过滤、层析、电泳 4.2.2酶的保存 目的：保持酶的稳定性和活性 溶液保存 晶体或干粉保存 固定化酶，是指限制或固定于特定空间位置的酶。经物理或化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。制备固定化酶的过程称为酶的固定化。固定化所采用的酶，可以是经提取分离后得到的有一定纯度的酶，也可以是结合在菌体（死细胞）或细胞碎片上的酶或酶系。 4.3酶的固定化技术 固定化酶优点 ①可以多次使用，而且在多数情况下，酶的稳定性提高。 ②反应后，酶与底物和产物易于分开，产物中无残留酶，易于纯化，产品质量高。 ③反应条件易于