马铃薯的脱毒培养快繁.ppt

马铃薯的脱毒试管苗 * * 第十二章 马铃薯的脱毒与快繁 水培法与雾培法 马铃薯是一种全球性的重要经济作物。适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输，既是一种重要的粮食作物，也是一种调节市场供应的重要蔬菜。 马铃薯退化问题严重，叶片卷缩，降低产量，影响品质。病毒侵染是马铃薯退化的根源，高温是诱发病毒病的环境条件。 危害马铃薯的病毒有17种之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。由于马铃薯是无性繁殖作物，病毒逐代积累，日益严重，引起严重退化。马铃薯病毒可使块茎产量减少50% ~ 80%。 马铃薯茎尖组织培养—生产无病毒苗—提供优良种薯。 一、马铃薯的脱毒与快繁 （一）茎尖培养与脱毒 1. 茎尖培养脱毒程序 （1）取材：芽长到15 cm时，将顶端切下6-8 cm，去掉下面2片叶，在切口处涂上生根生长调节剂后，把切条植入一口径为10 cm、内装消毒营养土的花盆中，后用玻璃烧杯罩上，保持10 d。 再将其转入生长箱中，每天光照16 h，光照强度3000-4000 lx。2 周后去掉顶芽，以促进腋芽的生长。当腋芽长到1-2 cm时，折下腋生枝，用于消毒、接种。 （2）消毒： 水洗干净，无菌条件下先用70%的酒精浸组织15-20 s，再用2%次氯酸钠溶液浸泡4-5 min，然后用无菌水冲洗3 次。 （3）接种： 把芽置于解剖镜下，左手用一把镊子将芽按住，右手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，当形似一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来后，用锋利的长颈刀片将分生组织切下来，上面可带/也可不带叶原基，再用刀片将其接种到培养基上。 （4）培养基： MS培养基（提高NH4+、K+浓度，利于茎尖成活）。加入调节物质6-BA 0.5 mg/L，NAA 0.1-1.0 mg/L。 培养条件：温度25±2 ℃，光照16 h/d 当新梢长至2-3 cm时，转至生根培养基（MS培养基中加入0.3 mg/L的NAA） （5）病毒鉴定（指示植物法）： 马铃薯的病毒指示植物：苋科的千日红、藜科的杖藜、茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。 从被检植株上取下叶片，置于等容积的缓冲液（0.1 mol/L 的磷酸钠）中，研成匀浆。在指示植物的叶片上撒少许600 号的金刚砂。 然后将被检植物的叶汁液涂于其上，并稍加摩擦，以使指示植物叶表面细胞受到侵染，但又不要损伤叶片。约5 min后，用水轻轻洗去接种叶片上的残余汁液。一周后如果表现病毒病症状，则说明被检再生植物脱毒失败。 2、影响脱毒效果的因素 （1）外植体大小：0.2-0.3 mm，带1-2个原基为好 （2）茎尖所处部位：块茎脐部休眠芽的生长点、块茎顶部的粗壮芽、植株主茎的生长点 （3）病毒种类及复合感染（脱毒更困难） PSTV（条纹病毒）、PVS（S病毒）、PVX（X病毒）、PVM（M病毒）、PAMV（丛矮病毒）、PVY（Y病毒）、PVA（A病毒）、PVRV（卷叶病毒） 3、无毒材料的保存 将无毒原种种在温室或防虫罩内灭过菌的土壤里，以防蚜虫传毒或机械传毒 大规模繁殖时，种植在田间隔离区内 春播早留种和夏播留种 经过茎尖脱毒处理的无病毒植株，再通过离体培养进行繁殖与保存 （二）微型薯生产技术 1、试管生产 （1）单茎节扩大繁殖：由无性繁殖的试管苗中获得茎切段（每个茎段带1-2个叶片或腋芽），每个三角瓶里接4-5个茎段，进行培养。 （1）单茎节扩大繁殖： 培养条件：22 ℃，16 h补充光照1000 lx 常用培养基：MS+3%蔗糖+琼脂；MS+2%蔗糖；MS+CCC 50 mg/L+6-BA 6.0 mol/L+0.8%琼脂，或MS+50-100 mol/L香豆素；MS+3%蔗糖+4%甘露醇+0.8%琼脂。 当小植株4-5 cm时，进行第二步培养。 （2）微型薯诱导： 要求：有一定量的植物生长物质，暗培养 培养基：MS+50-100 mg/L香豆素的液体或固体培养基 2、微型薯温室多层架盘工厂化生产 4-6 层架进行培养，育苗盘规格60 cm×25 cm×4-6 cm，育苗基质为蛭石或马粪。 三角瓶繁殖的脱毒苗以单茎节或双茎节扦插，在人工调控的温度、光照下，经过60-90 d即可收获。 微型薯 直 接 定 植 试 管 苗 和 剪 尖 扦 插 法 * *