脂肪酶选择性催合成芦丁脂肪酸酯及物化性质.pdfVIP

脂肪酶选择性催化合成芦丁脂肪酸酯 及物化性质 材料学专业 研究生段煜 指导教师吴大诚 肿瘤、抗病毒、免疫调节等多种生物活性，在保健食品、化妆品和药剂配置等 领域有很大的应用前景。然而黄酮类化合物在自然界多以糖苷的形式存在，糖 苷极性大，具有一定的亲水性，它与脂肪和油类的相容性很差，难以在脂肪类 溶剂中稳定存在，这就限制了黄酮类化合物在这些领域的应用。据研究黄酮类 化合物的各种生物活性都是以抗氧化活性为基础的，与抗自由基或抗脂质过氧 化有关。特殊的结构赋予它一系列独特的化学性质，如能与多种金属离子发生 络合或静电作用，具有还原和捕获自由基的特性以及诸多衍生化反应活性等。 黄酮类化合物抑制低密度脂蛋白LDL氧化和抑制类胡萝卜素及不饱和脂肪酸氧 化的研究表明，苷元比糖苷具有更优秀的抗氧化活性。这是由于苷元亲脂性强， 能嵌入生物膜疏水层的内核中发挥作用。黄酮苷类化合物的多羟基及糖基结构 使其具有一定的亲水性，这势必会影响抗氧化活性。黄酮类化合物通过酯化修 饰，在分子中引入长烃链可以增加它的脂溶性，从而增加和脂肪的相容性及提 高抗氧化性。然而通常的化学修饰反应选择性差，黄酮类化合物的多个羟基都 有可能参与酯化，往往结合或屏蔽了主要活性基团，虽然增加了其脂溶性，但 降低了本身的抗氧化效果。因此，化学修饰酯化反应通常要经“基团保护．酯化 ．脱保护基团”三步。酶催化反应具有较强的专一性与选择性，可以选择酯化黄 酮类化合物的某位羟基。到目前为止，黄酮苷在酶催化下的酯化已有比较详细 的研究，但反应中分子筛添加时间的不同对酯化反应的影响还未见有文献报道。 目前引入黄酮苷分子中的最长烃基链也只有16个碳长度，烃链进一步增长可能 赋予酯化产物新的性质，比如两亲性。正是基于这些原因，本文以硬脂酸、月 桂酸和正己酸为酰基供体，以脂肪酶Novozym435为催化剂对芦丁进行选择性 酯化，合成并提纯出了三种含不同烃基链长度的芦丁脂肪酸酯。用红外光谱和 核磁共振波谱对其进行结构鉴定，结果表明该类酯化物的酯化反应位为鼠李糖 的c4…位羟基。以高效液相色谱监测酯化反应进程，首次研究了分子筛添加时 间不同对酯化率的影响。结果显示，添加了分子筛的酯化反应的酯化率和反应 速率远大于不添加分子筛的情况。分子筛添加时间不同，酯化率也不同。对于 硬脂酸为酰基供体的情况，反应24小时眉添加分子筛的酯化反应可以得到最大 的酯化转化率46％。以月桂酸为酰基供体的酯化反应，反应1l小时后添加分子 筛可以得到最大的酯化转化率64．5％。本实验首次得到了芦丁脂肪酸酯的紫外一 nm和357nnl有特征吸收。 可见光谱，芦丁脂肪酸酯在256 生物分子的吸收代谢涉及它们和生物膜的相互作用，生物膜的结构形态和生 理性质如通透性、流动性等随之发生变化。黄酮类化合物和脂质体双层膜相互 作用的研究比较多，很少有和单分子膜相互作用的报道。磷脂单分子膜通常作 为生物膜的简化体系。研究黄酮类化合物和磷脂单分子膜的相互作用可以从分 子水平上揭示黄酮类化合物的抗氧化机理。但是黄酮类化合物的分子为多苯环 排列的平面结构，不能在气／液界面铺展，因此以黄酮类化合物为模型物的单分 子膜研究很少。然而通过酯化将长碳链引入黄酮类化合物分子中，这将赋予它 具有两亲分子的特征，亲水基为带芸香糖和多个酚羟基的芦丁母核，疏水基为 多碳烃基链，分子具有两亲性而且水溶性很低，能在空气，水界面铺展为单分子 膜，可以作为一种研究单分子膜的新型模型分子。而且芦丁脂肪酸酯单独成膜 性质的研究能够为它和生物膜相互作用的研究打下基础。 相中的A13+对其成膜性质的影响，为进一步研究它们和磷脂单分子膜的相互作 用打下基础。研究结果表明芦丁脂肪酸酯的成膜性与引入的碳链长度、压膜速 度和亚相性质有关。RS及RL在空气，水界面都铺展为液态扩张单分子膜，它们 在水面的形态为苷元部分保留在空气／水界面，芸香糖的两个糖基紧密排列于水 面下，疏水链松散地伸向空气中。RS能铺展成较RL稳定的单分子膜。但相对 于庞大的亲水基，两者引入的碳链较短，均不能在水面形成足够稳定的单分子 膜。RC在水中有很大的溶解度，不能在水表面形成单分子膜。在Al”的水溶液 表面。由于亲水基与A13+络合，使更多的芦丁脂肪酸酯分子能够保留在亚相表 表面形成液态扩张膜。 本文合成的芦丁脂肪酸酯是一类