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实验一 水质毒性快速测定 熊金波 xiongjinbo@nbu.edu.cn 689449 实验目的 实验原理 实验步骤 实验材料和仪器 注意事项 1 2 3 4 5 目录 1 实验目的 掌握水质毒性快速测定的原理和方法 了解水质毒性评价 2 实验原理 发光细菌是一类可以自身发出蓝绿色光的细菌，一旦遭遇外界不利因素，如有毒物质，会很“敏感”地反应，立即影响发光强度; 抑制程度跟所受到的毒物的浓度及其毒性大小正相关； 抑制程度可以用光电传感器检测，推算样品毒性大小。 2 实验原理 通过检测水质综合毒性对发光细菌毒性发光强度的抑制率来确定水样的毒性强弱。 发光细菌的发光强弱，能表示其生命力强弱。 细菌荧光素酶 (LE) 还原性的黄素单核苷酸(FMN·H2) 长链脂肪醛(RCHO) 2 实验原理 毒性抑制发光，变化程度与受试物浓度在一定范围内线性相关； A.直接抑制参与发光酶的活性 B.抑制细胞内与发光反应有关的代谢过程 受试毒性 发光强度 3 实验材料和仪器 便携式水质毒性分析仪 发光菌剂 自来水 池塘水 4 实验步骤——试剂准备 （活化） 用500 ul复苏稀释液使1小瓶 发光细菌冻干粉试剂水合 用50 ul移液枪吹打试剂3-4次，使试剂混合均匀 将水合的试剂放在室温（21-25℃）下15 min 1 2 3 4 实验步骤——测试样本准备 将试管A1、A2放到试管架的A1和A2位置 将待测样品与渗透压调节液按9：1的 比例混合，手指夹住试管，手腕甩动， 使其充分混合均匀 4 实验步骤——测量过程 A1 A2 1ml复苏稀 释液（空白） 1ml渗透压调节 后的样本 900 + 100渗透压调节液 4 实验步骤——测量过程 A1 A2 50ul水合后的试剂 （先放置15min） 加液间隔时间15s，用1ml的移液枪吹打3-4次混匀 （每管用一个Tip头，避免交叉感染） 发光细菌菌液 4 实验步骤——测量过程 试剂反应5min，以A1管加入试剂时刻开始计时； 4min时，开机 ； 5min时，将A1管读完后，取出A1管；将A2管放 进仪器中读取A2管的读数，仪器自动给出样品的 相对发光度和RLU值。 4 实验步骤——测量过程 5 注意事项 1 认真准备样品, 去除影响检测的因素,如色、PH、氯、浊度 2 反应试剂水合过程混匀必须充分,水合完全！ 3 手不应接触任何试管的中下部 4 必须熟练、准确地使用移液枪吸取或混合样品 5 移液枪量程选择得当,计量无误 6 吸取水合反应试剂等有气泡的液体时,移液枪头应该放置于试 管底部吸取 7 样品稀释过程中避免飞溅、挂壁等现象,造成样品损失 8 避免试剂、样品污染（注意更换枪头，保证试管干燥洁净） 9 实验时间控制准确 10 稀释液不可用超纯水或自己制备的代替 补充内容——生物传感器 Xiong et al., 2011 Res Microbiol