放射性标记化合物kejian.pptVIP

1、放射性杂质的来源 ：标记和贮存中产生。 贮存过程中产生放射性杂质的原因主要是辐射自分解。 因此，放射性核素标记产物，必须进行必要的纯化，使用前也应进行放射化学纯度的监测，根据有无分解进行纯化。 七、放射性标记化合物的纯化、鉴定 2、标记物的纯化： 最常用的有效方法是色谱法，或叫层析法。 主要有柱层析、薄层层析和纸层析，凝胶过滤法，高效液相色谱和气相色谱也是目前常采用的方法。 其次还有透析法和电泳法等。 （1）纸层析（paper chromatography, PC）纯化： 纸层析是以层析纸作为固定相，以适当的展开剂作为流动相，当样品随着流动相从点样的下端沿着纤维素分子上行时，由于样品组分的性质不同，在固定相上的吸附能力和在流动相中的溶解度的不同，各个组分在固定相上的移动距离也就不同，从而使各个组分能有效地分开。 固定相：Whatmman 1#、2#、3#，新华滤纸1#、2#、3# 流动相（展开剂） 原理：样品中的各组分在固定相和流动相中分配系数不同。 常用比移值Rf来表示各组分移动的相对速度。 Rf ( rate of flow , 比移值 )＝溶质移动的距离/溶剂移动的距离＝原点至样品中某组分的距离/原点至溶剂前沿的距离 产品的放射性计数 放射化学纯度 (%) = 放射性总计数 . . 纸层析示意图 （2）薄层层析纯化： 基本原理因固定相的不同而异。 例如：硅胶或氧化铝作为固定相的分离原理是根据各个组分吸附力和分配系数的不同；离子交换树脂作为固定相的分离原理是根据各个组分离子荷电性质和数量的不同；聚酰胺作为固定相的分离原理是根据各组分的氢键吸附能力的不同。所以，应该根据待分析的物质的性质，选用相应的固定相和展开剂。 Rf在0-1之间。在同一层系系统和同一展开剂条件下，某物质的Rf值总是保持不变的。 （3）凝胶过滤层析 常用的葡聚糖凝胶是一种网状多孔的分子筛，小分子物质可以进入凝胶粒子的网孔内部，而分子较大的物质则进不去，只能沿着凝胶粒子间的间隙下行。因此，在洗脱过程中，大分子物质由于行程短而被最先洗脱出来；相反，分子小的物质推进较慢，最后才被洗脱出来，从而达到分离的目的。 凝胶过滤法是一种高效、温和的纯化方法，适用于分子量相差较大的物质分离，对于放射性碘标记蛋白和肽类混合物的纯化是比较适用的。 3、标记物的鉴定 放射性核素标记化合物分离纯化后，要进行放射化学纯度和生物或免疫活性的鉴定。 （1）放射化学纯度的测定 常用的方法有：放射性纸层析或薄层层析法，放射性高效液相层析法和放射性凝胶电泳法。 其中，放射性凝胶电泳法常用于蛋白质和多肽的放射化学纯度鉴定，聚丙烯酰胺凝胶电泳是常见的凝胶电泳方法。 凝胶电泳除了一般的电泳分离的电荷效应外，还兼有凝胶的分子筛效应，因此，在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，各种蛋白质的迁移率取决于它们的净电荷多少，以及分子的大小和形状等因素。 （2）生物活性的鉴定 生物活性和免疫活性的鉴定，需要根据标记化合物的生物性质，以及示踪实验的具体要求而定，可进行特异性结合试验和生物特性测定。 例如：受体的生物活性可通过受体与配体的结合率以及受体特性来说明。 抗体生物的活性可通过抗原抗体结合率的测定来比较。 4、标记物的质量控制 性状 （1）物理性质检测 放射性活度 放射性核纯度 定义：指特定放射性核素的放射性占总放射性的百分数。 测定方法： 能谱法 屏蔽法 半衰期法 放射性核纯度 pH值 （2）化学性质检测 化学纯度 放射化学纯度 化学纯度是指以某一形式存在的物质的质量占该样品总质量的百分数。 放射化学纯度（radiochemical purity, RP）：指以特定化学形态存在的放射性核素活度占样品总活度的百分数。 99mTc-药物 99m