淀粉样蛋白Aβ突变体的制备、性质及神经细胞毒性机制的研究.pdf

三实验结果及讨论……………………………………………………………．68 参考文献：………………………………………………………………………73 第四章淀粉样蛋白hADl．40的小角x射线散射研究……………………………．76 一小角x射线散射简介………………………………………………………76 二实验方法……………………………………………………………………．79 三数据处理及结果与讨论……………………………………………………．79 1一维积分…………………………………………………………………80 2旋转半径…………………………………………………………………83 参考文献：………………………………………………………………………88 工作总结和展望…………………………………………………………………9l 一工作总结…………………………………………………………………91 二工作展望………………………………………………………………．．92 附录一：本论文所涉及的质谱图…………………………………………………．．93 附录二：本文所涉及到的测序图…………………………………………………．．94 附录三：本文专业名称缩写全称…………………………………………………100 攻读硕士期间已经完成和待发表的论文…………………………………………101 致谢…………………………………………………………………………………………………………102 2 万方数据 摘要 阿尔茨海默病(Alzheimer’s Alzheimer于1907 disease，AD)是德国学者砧ois 年首次报道的一种常发于老年人当中的神经退行性疾病。全世界大约有3000万 人患有阿尔茨海默病，并且患病人数正在逐年增加，严重威胁到人类的健康。 AD患者的主要临床表现为不同程度的记忆力丧失、认知能力降低、语言功能丧 失、行为和感情活动异常。AD的病理特征包括神经元数量减少，颗粒空泡变性、 淀粉样斑块和神经纤维缠结。AD的发病原因十分复杂，可能是多种因素相互作 用的结果，迄今为止，其确切的发病机理还是一个未解之谜。 beta 淀粉样蛋白AD(amyloidpeptide)是AD患者脑中老年斑(senileplaques， sp)的主要组成成分，在AD的发病机制的研究中占据着中心地位。在AD患者 的脑内，AD由淀粉样前体蛋白APP(amyloid 放进入突触，与同样释放进入突触中的游离状态的Cu：+，历寸等金属离子发生作 用。在AD病人脑中，金属离：F(Cu2+，Zn2b能够诱导AD聚集，同时促进自由基 的产生，进一步加剧细胞毒性。与人淀粉样蛋(a(humanamyloidbeta,hAl3)的氨基 酸序列相比，鼠淀粉样蛋I刍(mouseamyloidk饥mAD)的氨基酸序列发现了三个 位点的氨基酸突变，即第五位的精氨酸变成了甘氨酸(RSG)，第十位的酪氨酸变 成了苯丙氨酸(Y10F)和第十三位的组氨酸变成了精氨酸(H13R)。成年鼠类的大脑 中没有发现老年斑，可能与这三个位点的氨基酸密切相关。研究表明， AD的神经细胞毒性中发挥着重要的作用。除了AD在脑中的聚集以外，AD的细 胞病理学特征还包括血红素代谢紊乱。体外实验表明化学合成的AD通过Ar95 和Hisl3与血红素结合后形成具有过氧化物酶活性复合物。通过比较mAD和hAD 的性质和神经细胞毒性的差异，我们试图了解成年鼠大脑中没有淀粉样斑块的原 因及其相关分子机制。通过原核表达系统获得了mAO和l认D，我们通过圆二色 谱，硫磺素荧光光谱，ANS荧光光谱和透射电镜检测了mAD和hAD的聚集情况。 细胞层次上使用荧光探针检测了ROS产生情况，同时测定了细胞活性。我们还 监测了mAD和hAD与Heme的结合以及形成