重组腺相关病毒IκBαM在骨髓间充质干细胞中的表达及对胰腺星状细胞的体外调控.pdf

摘要 摘 要 背景和目的 慢性胰腺炎(chr0Ilic 慢性炎症，其缓慢发展的病变最终可引起胰腺坏死、纤维化，腺泡和胰岛细胞萎缩消失， 导致胰腺结构破坏和胰腺内、外分泌功能减退或丧失。其典型的病理表现为胰腺实质纤 维化、腺泡细胞萎缩等，而胰腺纤维化的主要特征之一是大量纤维细胞增生和细胞外基 质沉淀。在胰腺纤维化中，胰腺星状细胞(pancreatic 维化的主要效应细胞。PSC分为静止和活化两种表现型。在未损伤的胰腺组织中PSC 呈静止状态。胰腺受损时，在各种刺激因子的作用下使PSC活化，能产生I型、Ⅲ型胶 原及纤连蛋白等主要的细胞外基质，在胰腺纤维化中起重要作用。导致PSC活化的最重 要的促纤维化因子转化生长因子和血小板衍生生长因子通过旁分泌激活PSC。因此，抑 制PSC的活化和诱导其凋亡来抗胰腺纤维化成为可能。 骨髓间充质干细胞(m懿锄chymal 体干细胞，其具有自我更新、多向分化能力和较强的增殖能力，在不同的条件下可分化 为骨细胞、脂肪细胞、肌细胞、神经细胞和肝细胞样细胞等，是细胞治疗和基因工程的 重要种子细胞。骨髓间充质干细胞能分泌多种细胞因子，如白细胞介素、干细胞因子、 转化生长因子、肿瘤坏死因子、肝细胞生长因子及神经生长因子等。不仅能抑制胰腺炎 factor 与核转录因子．r,B(Nuclear B，NF．诏)发生不可逆性的结合形成三聚体以无 kappa 活性的复合物形式存在于细胞胞质中。使NF．xB处以静息状态，从而起到抑制炎症反应 培养，观察MSCs对PSC有无抑制作用，并探讨其机制是否与抑制炎症因子引起的炎症 反应及抑制NF．r,B的活性有关，从而产生抑制PSC的活化和促进其凋亡作用，为进一 步进行体内试验提供理论基础和实验依据。全文分为两部分进行研究。 重组腺相关病毒Ir、BaM在骨髓间充质干细胞中的表达及对胰腺星状细胞的体外调控 材料与方法 1．重组腺相关病毒IKBaM在骨髓间充质干细胞中的表达 胞计数用。37C5％C02培养箱培养12h。观察细胞是否正常，计数细胞。用无血清的 DMED培养液将细胞系两遍。按感染复数(Multiplicity (Adono-associated 5％CCh培 液分别加入每孔细胞中，每孔细胞加200p1。并作复孔。将24孔板置于3712 Western blot法检测IxBaM的表达。 2．转染IrdBaM骨髓间充质干细胞对胰腺星状细胞的体外调控 以Transwell 板为培养体系下层，接种胰腺星状细胞2x104个／孔，建立上下双层细胞培养体系， PSC的凋亡，PCR法检测凋亡基因BNIP3在PSC中的表达。 结果 1．重组腺相关病毒I的BaM在骨髓间充质干细胞中的表达 1．1 1．2 Western 转染组和未转染对照组为弱阳性条带。rAAV-Ir,13aM转染MSCs3d后在细胞裂解液中 Ir,BaM含量明显高于rAAV-GFP转染组和对照组。 2．转染IKBaM骨髓间充质干细胞对胰腺星状细胞的体外调控 降，差异有统计学意义俨0．05)：A组、B组两组问差异无统计学意义(尸o．05)。 Ⅱ 摘要 学意义俨0．05)；B组、C组两组间差异无统计学意义(舢．0S)。 结论 无明显影响，能在MSCs细胞内稳定高水平的表达。 和促进细胞凋亡的双重作用。 关键词：骨髓间充质干细胞：腺相关病毒；Ir,Ba；胰腺星状细胞；核转录因子．心 Abstract Abstract and BackgroundoHeetive andductof Chronic causeddifferentkindsofreasonstotheessence by pancreat