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Chapter 9: Kinetics of enzyme-catalyzed reactions 一、化学动力学基础 ◇ （一）反应速率及其测定 ◇ （二）反应分子数和反应级数 ◇ （三）各级反应的特征 （一）反应速率及其测定 反应速率是以单位时间内反应物或生成物浓度的改变来表示。随着反应的进行，反应物逐渐消耗，分子碰撞的机会也逐渐渐小，因此反应速率也随着减慢。 （二）反应分子数和反应级数 1.反应分子数 2.反应级数 （三）各级反应的特征 1.一级反应 反应速率与反应物浓度呈正比。 2.二级反应 反应速率与反应物浓度的二次方（两种底物浓度的乘积）成正比。 3.零级反应 反应速率与反应物浓度无关而受其他因素的影响而改变的化学反应。 二、底物浓度对酶反应速率的影响 ◇ （一）中间络合物学说 ◇ （二）酶促反应的动力学方程式 ◇ （三）多底物的酶促反应动力学 （一）中间络合物学说 在酶催化的反应中，第一步是酶与底物形成酶－底物中间络合物。当底物分子在酶作用下发生化学变化后，中间复合物再分解成产物和酶。 E + S ==== E-S ??? P + E ? 许多实验事实证明了E－S络合物的存在。E－S复合物形成的速率与酶和底物的性质有关。 酶催化的中间产物理论 1.ES复合物已被电子显微镜和X射线晶体结构分析直接观察到。 2.许多酶和底物的光谱性在形成ES复合物后发生变化。 3.酶的物理性质，经常在形成ES复合物后发生变化。 4.超离心沉降过程中，可观察到酶和底物的共沉降。 （二）酶促反应的动力学方程式 ◇ 1.米氏方程及推导 ◇ 2.动力学参数的意义 ◇ 3.利用作图法测定Km和Vmax值 1.米氏方程及推导 ◇ 底物浓度对酶促反应速度的影响 ◇ 米氏方程 ◇ 米氏方程的推导 底物浓度对酶促反应速度的影响 米氏方程 米氏方程的推导 基本前提 2.动力学参数的意义 ◇ (1)米氏常数的意义 ◇ (2)Vmax和K3（Kcat）的意义 ◇ (3) Kcat / Km的意义 (1)米氏常数的意义 ① Km是酶的一个特征性常数，只与酶的性质有关，与酶的浓度无关。 ② 如酶能催化几种不同的底物，对每种底物都有一个特定的Km值，其中Km值最小的称该酶的最适底物。 ③ Km除了与底物类别有关，还与pH、温度有关，所以Km是一个物理常数，是对一定的底物、一定的pH、一定的温度而言的。 ④Km与Ks：Km不等于Ks，只有在特殊情况下即 k2k3，Km=Ks。在Km=Ks 时，Km可表示酶 和底物的亲和力。 ⑤催化可逆反应的酶正逆方向反应的Km是不相同的，测定细胞内Km和正逆方向反应的底物浓度，可大致推测正逆反应的效率，判断酶在细胞内的催化的主要方向。 (2)Vmax和K3（Kcat）的意义 Vmax：在一定酶浓度下，酶对于底物的Vmax是一个常数。 K3：表示当酶被底物饱和时每秒钟每个酶分子转换底物分子数，即催化常数。 (3) Kcat / Km的意义 在生物体内，[S]/Km比值通常介于0.01与1.0之间。 Kcat/Km是E与[S]反应形成产物的表观二级速率常数。 3.利用作图法测定Km和Vmax值 1 Km 1 1 ??? = ?? ? ??? + ?? V Vmax [S] Vmax 双倒数作图法 （三）多底物的酶促反应动力学 双底物双产物的反应按动力学机制可分为两大类 : 有序反应及动力学方程 E+A+B—ABE—PEQ—E+P+Q A为领先底物 动力学方程 随机反应动力学方程 特点是：底物A和B随机和酶结合，产物P和Q随机和酶脱离 乒乓反应 （双置换反应）动力学方程 双置换反应的特点是：酶同A的反应产物（P）是酶同第二个底物结合之前释放出来，相应的酶转变E’。 乒乓反应动力学方程 乒乓反应动力学曲线图 三、酶的抑制作用 ◇ （一）抑制程度的表示方法 ◇ （二）抑制作用类型 ◇ （三）可逆抑制作用和不可逆抑制作用的鉴别 ◇ （四）可逆抑制作用动力学 ◇ （五）一些重要的抑制剂 （一）抑制程度的表示方法 1.相对活力数　 α＝vi/v0 2.相对活力百分数（残余百分活力数） α%＝vi/v0 ×% 3.抑制分数:指被抑制失去活力的百分数 i=1-α%=1-(vi/v0) 4.抑制百分数 i%=1-α%=1- (vi/v0) ×% （二）抑制作用类型 不可逆抑制 抑制剂与酶的必需基团以共价形式结合，引起酶的活行丧失。不能用透析、超滤等物理的方法除去抑制剂使酶复活。 如有机磷毒剂