2015年版中国药典微生物限度检查技术方法-意见稿.pdfVIP

附录××× 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准 时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外， 本法不适用于活菌制剂的检查。 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代 方法等效于药典规定的检查方法。 微生物计数试验应在受控洁净环境环境洁净度 10 000 级下的局部洁净度不 低于 B100 级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防 止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、 工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的 测试方法》的现行国家标准进行监测。 如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时, 若使用了中和 剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。 供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使 用中和剂或灭活剂的相容性。 计数方法 计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（Most-Probable-Number Method，简称 MPN 法）。MPN 法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微 生物污染量很小的供试品，MPN 法可能是更适合的方法。 供试品检查时, 应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数 方法，同时所选的方法的供试品用量必须具备检测充足样品量的能力，能够以保 证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。所选方法的适用性须经确 认。 计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。 供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合 于该产品的微生物计数。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用 性试验。 表 1 试验菌液的制备和使用试验菌株 试验菌液的 制备 计数培养基适用性检查 计数方法适用性试验 需氧菌总数 计数 霉菌和酵 母菌总数 计数 需氧菌总数 计数 霉菌和酵 母菌总数 计数 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 〔CMCC B 26 003 〕 胰酪大豆胨 琼脂或胰酪 大豆胨肉 汤，培养温 度 30 ～ 35℃，培养 时间 18～24 小时 胰酪大豆胨 琼脂和胰酪 大豆胨肉 汤，培养温 度 30 ～ 35℃，培养 时间不超过 3 天，接种量 不大于 100cfu 胰酪大豆胨 琼脂/ 胰酪 大豆胨肉汤 （MPN 法）， 培养温度 30～35℃，培 养时间不超 过 3 天，接种 量不大于 100cfu 铜绿假单胞菌 （Pseudomonas aeruginosa ） 〔CMCC （B）10 104 〕 胰酪大豆胨 琼脂或胰酪 大豆胨肉 汤，培养温 度 30 ～ 35℃，培养 时间 18～24 小时 胰酪大豆胨 琼脂和胰酪 大豆胨肉 汤，培养温 度 30 ～ 35℃，培养 时间不超过 3 天，接种量 不大于 100cfu 胰酪大豆胨 琼脂/ 胰酪 大豆胨肉汤 （MPN 法）， 培养温度 30～35℃，培 养时间不超 过 3 天，接种 量不大于 100cfu 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis 〔CMCC B 63 501 〕 胰酪大豆胨 琼脂或胰酪 大豆胨肉 汤，培养温 度 30 ～ 胰酪大豆胨 琼脂和胰酪 大豆胨肉 汤，培养温 度 30 ～ 胰酪大豆胨 琼脂/ 胰酪 大豆胨肉汤 （MPN 法）， 培养温度注：当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌和酵母菌总数时，应进行培养基灵敏度检查， 检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基。 菌种及菌液制备 35℃，培养 时间 18～24 小时 35℃，培养 时间不超过 3 天，接种量 不大于 100cfu 30～35℃，培 养时间不超 过 3 天，接种 量不大于 100cfu 白色念珠菌 Candida albicans 〔CMCC F 98 001 〕 沙氏葡萄糖 琼脂或沙氏 葡萄糖肉 汤，培养温 度 20 ～ 25℃，培养 时间2～3 天 胰酪大豆胨 琼脂，培养 温 度 30 ～ 35℃，培养 时间不超过 5 天，接种量 不大于 100cfu 沙氏葡萄 糖琼脂，培 养温度 20～25℃， 培养时间 不超过 5 天，