《紫外-可见光谱》.pdfVIP

紫外紫外--可见光谱可见光谱 (UV-vis spectroscopy) 杜海宁 梁毅 ((武汉大学生命科学学院武汉大学生命科学学院)) 现代仪器分析中的 “四大谱”和 “三大法”  生物分子的结构分析生物分子的结构分析传统上最有效的方法是传统上最有效的方法是 “四大谱”： 紫外紫外-可见光谱可见光谱、、红外光谱红外光谱、、核磁共振波谱和核磁共振波谱和 质谱  生物大分子（蛋白质和核酸等）结构测定的 最重要和应用最广泛的最重要和应用最广泛的三大方法三大方法：： X射线晶体衍射分析、核磁共振波谱分析和 电镜三维重构 紫外紫外--可见光谱法可见光谱法 通过研究溶液中生物分子对紫外和可见光谱区通过研究溶液中生物分子对紫外和可见光谱区 辐射能的吸收情况对生物分子进行定性、定量 和结构分析的方法  特点特点：： 1）灵敏度和准确度 2）选择性 3）设备简单，操作简便，应用广泛 远红外光谱或分子转动光谱远红外光谱或分子转动光谱：：分子本身绕其重心的转动分子本身绕其重心的转动 跃迁产生的吸收光谱位于远红外区 红外光谱或分子振动光谱红外光谱或分子振动光谱：：原子核在其平衡位置附近的相对振动原子核在其平衡位置附近的相对振动 跃迁产生的吸收光谱位于红外区，吸收光波长范围2.5-1000 m  紫外-可见光谱或分子的电子跃迁光谱：电子相对于原子核的运动 电子跃迁产生的吸收光谱在紫外-可见光区，电子能级之间的跃迁 对应于可见光区（400-750 nm ）、近紫外光区（200-400 nm ) 和 远紫外光区（10-200 nm ) 电子跃迁类型电子跃迁类型 生物分子的紫外-可见吸收光谱是3种电子跃迁的结果：电 子、电子和n 电子 Far UV ((λλ190190 nmnm )) UV/VIS 生色团与助色团 生色团： * * 由→ 和n→跃迁产生的。 生物分子中含有不饱和基团生物分子中含有不饱和基团。。 这类含有键的不饱和基团称为生色团。 简单的生色团由双键或叁键体系组成简单的生色团由双键或叁键体系组成，，包括乙烯基包括乙烯基、、羰基羰基、、亚硝亚硝 基、偶氮基-N N- 、乙炔基和腈基-CN 助色团助色团：： 含有孤对电子，与生色团相连时，就会发生n-共轭作用，增强 生色团的生色能力生色团的生色能力((吸收波长向长波方向移动吸收波长向长波方向移动，且吸收强度增加且吸收强度增加))， 这样的基团称为助色团。 常见助常见助色团为团为： -OH、-OR、-NH ２、-NHR和-X等 红移与蓝移 在分子中引入的一些基团或受到 其它外界因素影响其它外界因素影响，吸收峰向长吸收峰向长 波方向（红移）或短波方向移动 （蓝移蓝移）的的现象象。 1）共轭体系的存在红移 2 ）异构现象：使异构物光谱出现差异。 3 ）空间异构效应红移 如CH I(258nm), CH I (289nm), CHI (349nm) 3 2 2 3 4 ）取代基：红移或蓝移。 取代基为含孤对电子，如-NH2、-OH、-Cl，可使分子红移；取代基为斥电子基， 如-R，-OCOR，则使分子蓝移。 苯环或烯烃上的H被各种取代基取代，多产生红移。 5）pH值值：红移或蓝移红移或蓝移 6 ）溶剂效应：红移或蓝移 紫外紫外--可见吸收光谱可见吸收光谱  朗伯朗伯(Lambert)(Lambert)-比尔比尔(Beer)(Beer)定律定律 C A