河北省汉坦病毒的分离及其代表毒株S片段全基因序列分析.pdfVIP

中文摘要 河北省汉坦病毒的分离及其代表毒株 S片段全基因序列分析 摘 要 目的：以河北省肾综合征出血热疫区汉坦病毒抗原阳性 的鼠肺标本为研究对象，分离汉坦病毒，进行型别鉴定，对 所分离病毒全s基因片段核苷酸序列进行分析，阐明河北省 疫区汉坦病毒型别和基因特征，指导本病诊断、预防和控制。 方法： 1 IFA法对鼠肺标本进行初筛，免疫荧光阳性者采取细 胞培养的方法分离病毒。 2复苏既往保存的病毒毒株。 3提取病毒RNA后采用反转录套式PCR进行基因分 型。 4RT-PCR法扩增全S基因片段，产物纯化后经TA克隆 连接入pMDl9．T质粒载体，转化入JMl09感受态细菌。 5筛选阳性重组质粒，提取后测序，用分子进化方法和 软件分析病毒核苷酸和氨基酸的同源性，并绘制系统进化 树。 结果： 1 4份阳性鼠肺标本的组织悬液接种Vero．E6细胞3~4 代后，经IFA检测细胞内出现病毒特异性荧光颗粒，未发现 致细胞病变效应(CPE)。 24份标本全部分离成功，得到4株汉坦病