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钩端螺旋体比较基因组研究 摘要 Part I应用抑制消减杂交技术对问号钩端螺旋体赖株特异性基因的筛 选和分析 在亲缘性较近的细菌中，那些只存在于致病菌而不存在于非致病菌 的基因往往具有重要的生物学意义。本实验通过抑制消减杂交技术，以 选出致病钩端螺旋体特有的基因片段。经两轮消减杂交和PCR后，获得 的消减混合物克隆入pMDl8一T载体中建立消减杂交文库。经dot 选鉴定阳性克隆，并进行测序及同源分析。用PCR方法验证所得的基因 用dot 株特异的基因序列，其中5个克隆含有的序列为非编码区，剩下的19个 编码亮氨酸富含序列家族蛋白，1个编码外膜蛋白， 9个编码与代谢和 物质转运相关蛋白，其余12个编码功能未知蛋白。经dot 现上述23个赖株特异基因存在于赖株及其他大部分致病性钩端螺旋体 中，不存在于非致病性钩端螺旋体中。本部分研究结果显示抑制消减杂 交技术是在两株钩端螺旋体间筛选特异基因的有效方法，筛选到的一些 赖株特异基因可能与毒力有关。进一步探讨这些基因的生物学功能将对 钩端螺旋体的致病机制的研究提供重要信息。 关键词：问号钩端螺旋体，抑制消减