Shewanela oneidensis MR-1对砷甲基化及其影响因素研究.pdfVIP

万方数据 摘要 不同类型的砷，其毒性有着很大的差异，含砷化合物进行氧化或者甲基化反应会 降低砷的毒性。Challenger 机制作为普遍接受的生物砷甲基化理论提出，微生物将无 机砷转化为有机砷时，是通过微生物自身电子的传递链作用将砷进行交替氧化还原的 反应过程。在实验室模拟的条件下，论文研究了S.oneidensis MR-1 在不同影响因素下 对砷甲基化的作用。研究结果为S. oneidensis MR-1 对生物砷甲基化的过程及其影响 因素提供了直接证据。本论文主要研究内容和结果如下： 1. S. oneidensis MR-1 对不同价态的无机砷 （iAs ）具有一定的耐受力。当As3+浓度超 过13.35 molL-1 时，S.oneidensis MR-1 依旧可以生长，但受到一定程度的抑制，主 要表现为菌株生长期延长，对数期推迟。但S. oneidensis MR-1 在浓度为13.35 molL-1 的As5+溶液中生长时，表现出良好的砷耐受力和生长活力。结果表明：在浓度一致的 iAs 条件下，对于S. oneidensis MR-1 菌株，As3+ 的毒性大于As5+ 的毒性。 2. 研究发现存在甲基供体的情况下，S. oneidensis MR-1 在生长过程中能够将As5+转 化为甲基砷。在初始As5+浓度为13.35 molL- 1、温度30℃的厌氧条件下，溶液中S. oneidensis MR-1 的甲基化率达到19%。在S. oneidensis MR-1 菌株细胞中产生了 MMA 、DMA ，其细胞中DMA 的变化趋势和溶液中DMA 的变化趋势保持一致。实 验结果表明，S. oneidensis MR-1 对砷的甲基化过程很有可能是细胞内的酶促反应。 3. 考察了不同温度、初始pH 值、培养基成分对砷甲基化的影响。结果表明：在30℃ 的厌氧条件下，S. oneidensis MR-1 的砷甲基化率最高，证明在此温度下最利于甲基砷 的产生。在弱酸性的环境中S. oneidensis MR-1 对生物砷甲基化效率高于弱碱性环境 中砷甲基化效率，证明在弱酸性的条件下有利于微生物进行砷甲基化。LB 培养基溶 液中产生的DMA 在1~5d 时呈现出含量逐渐增加的趋势，随后DMA 含量趋于平稳。 M1 培养基溶液中产生的DMA 在3 d 时含量达到峰值，随后DMA 的含量逐渐下降， 说明培养液中具有电子传递物质的培养基能促进iAs 转化为有机砷，碳源是保证微生 物生长、进行砷甲基化的前提。 4. 考察了不同甲基供体对生物砷甲基化的影响。结果表明：甲基谷氨素(CH CoB )、 3 12 活性腺苷甲硫氨酸(SAM)均可以作为S. oneidensis MR-1 砷生物甲基化过程的甲基供 体，但SAM 作为甲基供体时甲基化效率更高。还原性谷胱甘肽(GSH)作为细胞还原 剂，能够提高细胞内甲基砷的转化率。说明S. oneidensis MR-1 在生物砷甲基化过程 中对甲基供体的利用率不一样，甲基转移酶对SAM 的亲和力更强。同时GSH 加速 了细胞内的氧化还原反应，促进S. oneidensis MR-1 的生物砷甲基化。 I 万方数据 5. 考察了添加外源Fe3+对生物砷甲基化的影响。通过在同一反应体系中同时添加As3+ 和Fe3+ 的微生物混合培养实验，研究S. oneidensis MR-1 与砷铁络合以及砷甲基化之 间的关系。结果表明：As3+加入后在S. oneidensis MR-1 和Fe3+ 的作用下，迅速转化 为As5+ ，产生的As5+ 以Challenger 机制为模板进行生物砷甲基化过程。适当的Fe3+ (1.13 mmol