Vero细胞化污染物毒性表现特征及在生物毒性检测中的可行性分析.pdfVIP

摘要 摘要 近年来饮用水中化学污染物逐渐增多，对人体健康和生态环境造成的危害 日益加重，因此饮用水及相关材料的安全评价具有重要意义。但目前为止，国 内尚无较为完善的相关评价方法。细胞毒性试验，尤其是Vero细胞与人体高度 同源，对各类化学物质的响应具有一定的普适性，并且培养方法简单。本文研 究了有机物对Vcro细胞形态的影响和对细胞增殖的抑制，通过比较这两种细胞 毒性表现特征的灵敏度，分析了Vero细胞变形法在化学物质生物毒性检测中的 可靠性，同时应用流式细胞仪探索了污染物作用下Veto细胞状态的变化及可能 原因，最后尝试用该法来考察饮用水相关材料的生物安全性。 两种典型有机化学物2,4，6．三氯苯酚(TCP)和邻苯二甲酸二辛酯(DOP) 作用于Vcro细胞后的形态观察结果表明：和对照相比，当TCP浓度为O．5mg·L4 时，已有少量细胞变圆。随着药物浓度的增加，变圆细胞的比例增大；而DOP 浓度为O．5ppm时细胞轮廓开始加深，透明度下降，随着浓度进一步增加，形态 变化愈发明显。用MTT比色法测定TCP和DOP对细胞增殖抑制的结果表明： 之间呈良好的正相关性。而TCP浓度小于lmgoL4时对细胞增殖没有抑制作用， DOP在0．25ppm-2ppm之间抑制率随浓度呈不规律变化。 以TCP为例，用流式细胞术分析在有机物作用下Vcro细胞状态的变化，结 浓度较低(小于lmg·L4)时，细胞毒性主要表现为细胞形态的变化；当TCP浓 现特征和其暴露于TCP的时间也有重要关系。TCP作用24h后Vcro细胞的毒性 主要表现为对细胞膜完整性的影响，产生凋亡的细胞比例较小。而48h后，Vero 细胞出现凋亡现象，并且随TCP浓度增加，凋亡和坏死细胞比例大量增加。细 胞复壮实验进一步证实24h内TCP引起Veto细胞形态的变化不会导致细胞坏死 或凋亡，细胞仍处于存活状态。 结合细胞形态变化和流式细胞仪散点图，推测细胞形态变化和细胞膜损伤 有关。由细胞膜损伤导致的细胞变形可能是一种较细胞增殖率、凋亡、坏死等 指标更为敏感的化学物细胞毒性表征方法。 最后，利用Vero细胞形变法对给水PVC管和一次性塑料杯进行细胞毒性评 价，MTT法作为对照，实验结果表明：(1)给水PVC和一7欠往塑料杯的丰方科浸 提液会引起Vero细胞形态的变化。当浸提液浓度一定时，随着浸提温度的升高， 含两种材料浸提液的培养基中变形细胞的比例增加，说明温度升高会导致材料 浸提液中毒性物质的增多或浓度增大。(2)当温度一定(37C)时，随着浸提 液体积比的增加，变形细胞的比例明显增加。细胞变形和浸提液浓度之问存在 较好的相关性。(3)两种材料在各温度下的浸提液对Vero细胞增殖有一定的抑 制作用，但抑制率和温度之间缺乏相关性。(4)Pvc材料浸提液浓缩和稀释后细 胞增值率无明显变化，而一次性塑科浸提液对细胞增殖的抑制率和体积比有良 好的相关性。(5)从细胞变形和增殖受抑制的情况来看，一次性塑料浸提液对 Vero细胞的影响高于给水PVC材料，这可能表明一次性塑料的生物毒性比PVC 材料大。(6)Veto细胞形态法测定材料浸提液的生物毒性比MrT法灵敏，虽然 还难以准确定量，但可以作为一种毒性初筛的手段。 关键词：Veto细胞毒性检测MTT比色法流式细胞术安全评价 Ⅱ Abstract Abstraet An numberof in chemical arefound waterrecent increasing pollutants drinking resultin effect health years，whichgraduallyadverseonhuman andtheenvironment． evaluationall roleinthe to Therefore，safetyplaysimportant pr