基因工程及其应用教学课件精品.pptVIP

基因工程的概念 基因工程又叫做 或 。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加以 ，然后放到另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状。 磷酸二酯键 实例：EcoR Ⅰ限制酶能专一识别GAATTC序列，并在G和A之间将这段序列切开。 切割结果：产生两个带有黏性末端的DNA片段。 作用：基因工程中重要的切割工具。在微生物体内能将外来的DNA切断，对自己的DNA无损害。 基因工程操作步骤： （1）提取目的基因 （2）目的基因与运载体结合 （3）将目的基因导入受体细胞 （4）目的基因的检测与鉴定 二、目的基因与运载体结合——核心 基因表达载体的组成： 启动子+目的基因+终止子+标记基因 三、将目的基因导入受体细胞 方法： ①将目的基因导入植物细胞： 农杆菌转化法（双子叶植物和祼子植物）、基因枪法（单子叶植物）、花粉管通道法 ②将目的基因导入动物细胞 显微注射法 ③将目的基因导入微生物细胞 感受态细胞（用Ca2+处理）；电激或热激 四、目的基因的检测与鉴定 分子水平检测： ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因： 方法——DNA分子杂交 ②检测目的基因是否转录出了mRNA： 方法——DNA分子杂交 ③检测目的基因是否翻译成蛋白质： 方法——抗原——抗体杂交 （如果有，表示目的基因已经进行了翻译） * 基因拼接技术 DNA重组技术 基因 修饰改造 定向地 1.原理：基因重组 2.基因工程操作工具： （1）基因的剪刀—限制性内切酶 （2）基因的针线—DNA连接酶 （3）基因的运输工具—运载体 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶。 4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 T 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 二、 “分子缝合针” —— DNA连接酶 1、种类： 2、作用部位： 两类 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 1、通常以质粒作为载体 质粒——细菌细胞中一种很小的环状DNA分子。 裸露的、结构简单、独立于细菌之外，并且有自我复制能力 三、 “分子运输车” —基因进入受体细胞的载体： 质粒 1、充当载体的条件： 能自我复制 ② 有一个至多个限制酶的切割位点 ③ 具有某些遗传标记基因 ④ 对受体细胞无害，易分离 2、种类： 质粒、噬菌体、动植物病毒 补：原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。 ①不能转录为信使RNA，不能 编码蛋白质。 ：能转录相应的信使RNA，能 编码蛋白质 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列，在该序列中， 最重要的是位于编码区上 游的RNA聚合酶结合位点。 补：真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子，内含子不能转录为信使RNA 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用的核苷酸序列， 包括位于编码区上游的RNA 聚合酶结合位点。 非编码序列：包括非编码区和内含子 G C T T A A G C T T A A DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ 3．DNA连接酶与DNA聚合酶的不同 ①DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。 ②DNA聚合酶是以一条DNA链