基因工程及应用上课好精品.pptVIP

（一）、基因工程概念 ——定向改造生物的新技术 基因工程培育抗虫棉 苏云金芽孢杆菌→抗虫基因 →棉的细胞→抗虫棉 （二）、基因操作的工具 1、基因剪刀——限制性内切酶（限制酶） （二）、基因操作的工具 1、基因剪刀——限制性内切酶（限制酶） ①分 布： ②作用特点： ④举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 2、基因的针线——DNA连接酶 连接酶的作用： 将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 连接的部位： 磷酸二酯键，不是氢键。 DNA连接酶的作用过程 DNA连接酶的作用过程 3、基因的运输工具——运载体 作用： 将外源基因送入受体细胞。 2.条件： 能在宿主细胞内复制并稳定地保存。 具有多个限制酶切点。 具有某些标记基因 3.种类:： 质粒、噬菌体和动植物病毒。 质粒 细胞染色体外能自主复制的小型环状DNA分子； 质粒是基因工程中最常用的运载体； 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒； 质粒的存在对宿主细胞无影响； 质粒的复制只能在宿主细胞内完成。 将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来。 人工合成基因 3、将目的基因导入受体细胞（并扩增） 基因工程中常用的受体细胞： 导入受体细胞常用的方法： 目的基因的扩增 为什么要检测？ 检测方法？ 表达：受体细胞表现出特定的性状。 基因治疗： 是指是把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的。 患半乳糖血症的患者，由于细胞内半乳糖苷转移酶基因缺陷而缺少半乳糖苷转移酶，使过多的半乳糖在体内积聚，引起肝、脑等功能受损。 1971年，美国科学家在体外做了试验，用带有半乳糖苷转移酶基因的噬菌体侵染患者的离体组织细胞，结果发现这些组织细胞能够利用半乳糖了。这表明，用基因替换的方法治疗这种遗传病是可能的。 * * 基 因 工 程 简 介 例1: 治疗侏儒症的唯一方法，是向人体注射生长激素。而生长激素的获得很困难。以前，要获得生长激素，需解剖尸体，从大脑的底部摘取垂体，并从中提取生长激素。 现可利用基因工程方法，将人的生长激素基因导入大肠杆菌中，使其生产生长激素。人们从 450 L大肠杆菌培养液中提取的生长激素，相当于6万具尸体的全部产量。 什么是基因工程 例2:将细菌的抗虫、抗病毒、抗除草剂、抗盐碱、抗干旱、抗高温等抗性基因转移到作物体内，将从根本上改变作物的特性。如转基因抗虫棉。 例3:将人的生长激素基因和牛的生长素基因分别注射到小白鼠受精卵中，得到的“超级小鼠”。 例4:基因治疗： 是指是把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的。 患半乳糖血症的患者，由于细胞内半乳糖苷转移酶基因缺陷而缺少半乳糖苷转移酶，使过多的半乳糖在体内积聚，引起肝、脑等功能受损。 1971年，美国科学家在体外做了试验，用带有半乳糖苷转移酶基因的噬菌体侵染患者的离体组织细胞，结果发现这些组织细胞能够利用半乳糖了。这表明，用基因替换的方法治疗这种遗传病是可能的。 结 果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 别 名 人类所需要的产品 剪切→拼接→导入→表达 DNA分子水平 基因 生物外 基因拼接技术 或DNA重组技术 原 理： 基因重组 抗虫基因的结构有什么特点？ 限制性内切酶作用过程 主要在微生物中。 专一性 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子 多样性 限制酶有200多种 ④结 果： 产生黏性末端 ③作用实质： 使磷酸二酯键断开 例：已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC— ，请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。 点击播放 （三）、基因工程操作的步骤 提取 目的 基因 目的基 因与运 载体结 合 将目的 基因导 入受体 细胞 目的基 因地检 测和表 达 提取目的基因的方法： 方法一、 从供体细胞的DNA中直接分离基因（鸟枪法） 方法二、 人工合成基因 1、提取目的基因 取 出DNA 用多种限制酶切断DNA成为许多片段 直接分离基因——鸟枪法 优点：操作简单； 缺点：工作量大，具有一定的盲目性，又由于真核细胞中的基因含有不表达的DNA片段，不能直接用于基因的扩增和表达。 （真核生物的基因含有内含子，不能在原核细胞中正确表达） 蛋白质的氨基酸序列 mRNA 推测 推测 合成 目的基因 结构基因的核苷酸序列 目的基因的 mRNA 反转录 单链DNA 双链