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1、要确定抗虫基因导入受体细胞后，是否能够稳定遗传并表达，需要进行分子水平的检测和个体水平的鉴定工作。请写出在个体水平上的鉴定过程： * 1、基因工程的工具有哪些？ 2、限制酶的作用特点？ 3、基因表达载体有何功能？ 4、基因表达载体上的启动子的功能？ 5、核酸探针的制作方法？ 1)基因工程中，除质粒外， 和 也可作为运载体。 2）目的基因获取后，需要进行 其组成必须有 此步骤是基因工程的核心。 噬菌体 动植物病毒 基因表达载体的构建 启动子、目的基因、终止子、标记基因 3）人的胰岛素基因之所以能“嫁接”到大肠杆菌的DNA上，原因是 人的胰岛素基因和大肠杆菌DNA分子的空间结构、化学组成相同 2）由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率 所以在转化后通常需要进行 操作。 低 转化 1)将带有目的基因的重组载体与相应的受体细胞放在一起培养，通过一定方式进行诱导，使重组载体进入受体细胞，且能在受体细胞内稳定存在和表达的过程过程称为 筛选 3）经过转化后，有的细胞可能导入了重组载体，利用 就可以把含有重组载体的受体细胞筛选出来。 选择性培养基 3）将重组质粒导入细菌，常用的方法是用 处理细菌，作用是 Ca2+ 增加细菌细胞壁的通透性， 4）获得转基因动物，需要将目的基因导入动物的 中，原因是 受精卵 受精卵具有全能性， 5）将目的基因导入双子叶植物细胞，常采用 法。目的基因能否在此植物体内稳定遗传的关键是 可以用 技术进行检测。 使细菌吸收重组质粒的能力增强 可使目的基因在相应的组织细胞表达 农杆菌转化 目的基因是否整合到植物细胞染色体上 DNA分子杂交 DNA分子杂交技术 抗原—抗体杂交 放射性同位素或荧光物质标记的胰岛素基因 若要检测胰岛素基因是否插入到细菌DNA上，可用 作探针与细菌DNA杂交，该杂交技术称为 若要检测胰岛素基因是否翻译成胰岛素，可采用 检测 让害虫吞食转基因棉花的叶子，观察害虫的存活情况，以确定转基因棉花是否具有抗虫性状。 2、为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交检测，又要用 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。 耐盐基因 将转基因水稻移栽到盐碱地的 3、将人的生长激素基因导入细菌细胞内制造“工程菌”。 1）在此转基因工程中，目的基因是 2）将质粒与生长激素基因结合构建重组载体的过程通常是在 完成的，此过程必须用的的工具酶是 3）通常用 法将重组载体导入受体细胞 4）转化完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入重组质粒，所以在基因工程的操作步骤中必须要有 5）若将重组质粒导入细菌后，目的基因在“工程菌”中表达成功的表志是什么？ 生长激素基因 体外 限制酶和DNA连接酶 感受态细胞法 筛选 工程菌生产出人的生长激素 抗虫基因（Bt毒蛋白基因） 转基因抗虫棉的培育过程 目的基因： 过程： 获取目的基因 （抗虫基因） 构建基因 表达载体 （农杆菌转化法） 目的基因的检测和鉴定 转基因抗虫棉 重组载体导入棉花体细胞 植物组织培养 人类胰岛素基因 用转基因奶牛生产人类胰岛素 目的基因： 过程： 获取目的基因 （人胰岛素基因） 构建基因 表达载体 （显微注射法） 目的基因的检测和鉴定 转基因牛 重组载体导入受精卵 人类生长激素 用大肠杆菌生产人类生长激素 目的基因： 过程： 获取目的基因 （人生长激素基因） 构建基因 表达载体 （Ca2+处理法） 筛选出含有重组载体的受体细胞 （选择性培养基） 重组载体导入大肠杆菌 目的基因的检测和鉴定 表达成功的标志是？ 大肠杆菌生产出人类生长激素 工程菌 抗虫棉叶子 正常棉叶子 二、基因表达载体的构建——核心 （1）用_______切下目的基因，使其产生_______。 （2）用_________ 切割质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 （3）将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组质粒 限制酶 黏性末端 同种限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA连接酶 1.过程: （4）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是？ 鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞