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基因转染技术及其应用简介 报告人: 陈 红 平 2006年11月 报告内容 一、基因转染简介 二、基因转染的基本方法 三、基因转染技术的应用  1.基因转染:将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能。 2.基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究和基因治疗研究。 二、基因转染的基本方法 (一)重组子构建 (二)基因转染真核细胞的基本方法 (一)重组子构建 1.目的基因的制备和获取 2. 哺乳动物细胞表达载体的选择 3. DNA片断的重组连接 4. DNA重组体的鉴定 1.目的基因的制备和获取 (1)目的基因 是所要研究或应用的基因，也就是将要克隆或表达的基因或基因的一个片段 (2)目的基因常用的制备方法 B. PCR或RT/PCR方法制备目的基因 a. 获取已知基因 据已发表的基因序列（或基因两侧序列已知） → 设计/合成一对引物 → PCR（基因组DNA为模板）/RT-PCR(mRNA为模板) → 从组织或细胞制备目的基因 b. 构建RT/PCR文库法获取未知基因 据mRNA末端如polyA尾设计共同引物 → 将所用mRNA并逆转录成cDNA利用工具酶在cDNA末端加尾 → 采用一对共用引物扩增所有cDNA，插入适当载体→ 构成PCR－cDNA文库筛选 C