态弧菌OmpU抗原B细胞线性表位的筛选和鉴定.pdfVIP

摘要 拟态弧菌(Vibrio mimicus,Vm )是一种水产养殖动物和人共患病病原菌。该菌 不仅可引起水产养殖动物严重的腹水病，而且可通过水体和水产品感染人类，导 致人类腹泻和食物中毒[1-6]。针对腹水病已成为制约水产养殖业健康发展的现状， 开展该病快速诊断方法的研究以及研制其有效疫苗具有十分重要意义，而筛选出 理想的侯选抗原或抗原表位则是急需解决的首要问题。本研究联合采用表位预测 和实验验证方法对拟态弧菌OmpU蛋白B细胞线性表位进行筛选鉴定，并分析表 位间的免疫活性差异，为建立基于抗原表位的快速诊断方法和研制表位疫苗奠定 基础。 首先，通过生物信息学软件 DNAStar Protean 综合分析 OmpU 蛋白的二级结 构、柔性区域、表面可及性、亲水性和抗原指数，预测 OmpU 蛋白可能的 B 细 胞线性表位。在应用 Moe2008 软件构建 OmpU 蛋白三维结构（3D ）的基础上， 利用 Synchronize 可视化程序将 10 个预测表位肽序列展示于 OmpU 蛋白 3D 结构 上，筛选出位于 3D 结构表面的 7 个肽段作为最可能的 B 细胞线性表位，并进行 生物合成，用于鉴定。 其次，将 OmpU 蛋白主要抗原域基因 OmpUa 亚克隆至表达载体 pAML-c4x 中进行诱导表达与鉴定，分析重组