临床血液学检验-1-7-造血检验基本方法2细胞化学染色检验创新.pptVIP

第一章 造血与血细胞检验第七节 骨髓检查二、细胞化学染色 【细胞化学染色概述】 细胞化学染色的概念 细胞化学染色的临床应用 细胞化学染色的基本步骤 （一）用于贫血的细胞化学染色（铁染色） 『用于贫血的常规细胞化学染色』 外周血网织红细胞计数（Ret/Retic/RC） 骨髓铁染色 【复习：外周血网织红细胞计数（Ret/Retic/RC）】 『问题』 在瑞氏染色下，能否较准确地区别成熟红细胞与未完全成熟的红细胞（网织红细胞） 网织红细胞计数有哪两种方法？在手工操作法中，我们染色及观察的是哪种化学物质 网织红细胞计数的参考值是多少？有什么临床意义 【骨髓铁染色】 染色原理及方法 正常血细胞的染色结果 细胞外铁：位于骨髓小粒内或巨噬细胞胞质内（即幼红细胞外） 细胞内铁：位于幼红细胞胞质内的铁 铁粒幼红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。计数100个中幼红和晚幼红细胞中铁粒幼红细胞的百分比即为细胞内铁阳性率 铁粒红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的红细胞 环形铁粒幼红细胞：幼红细胞胞质中蓝色颗粒6颗以上，围绕核周1/2以上者 参考值 骨髓细胞外铁：（+）~（++），约2/3人为（++），1/3人为（+） 骨髓细胞内铁：铁粒幼红细胞的阳性率为19%~44%，以I型为主，少数为II型 临床应用：用于贫血的诊断及鉴别诊断 （二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP染色） 染色原理及方法：Kaplow偶氮偶联法 正常血细胞的染色结果 阳性反应呈棕黑色颗粒，定位于成熟中性粒细胞胞质内。其他细胞呈阴性 油镜下计数100个成熟中性粒细胞，记录其阳性程度（－）、（＋）、（2＋）、（3＋）、（4＋），分别记为0、1、2、3、4分。计算阳性细胞总数为阳性率，阳性细胞的分数总和为阳性积分 参考值：阳性率＜40％，阳性积分14～113。各实验室之间可有较大差异，应建立各实验室的参考值 临床应用 NAP染色主要用于骨髓增生性肿瘤（MPN）的诊断与鉴别诊断。NAP是怀疑骨髓增生性肿瘤时应作的常规细胞化学染色 慢粒NAP显著减低，甚至为0，其他MPN为正常或增高 慢粒NAP显著减低，甚至为0，类白NAP显著增高 鉴别其他疾病 （三）急性白血病形态学分型的细胞化学染色 『急性白血病细胞分型的常规细胞化学染色』 过氧化物酶（POX）染色/苏丹黑B（SBB）染色 特异性酯酶（NAS-DCE）染色 非特异性酯酶（α-NAE/ α-NBE/ NAS-DAE / ANAE等）染色 过碘酸-雪夫（PAS）染色 酸性磷酸酶（ACP）染色 『问题』 在各系各阶段血细胞中，最难鉴别的细胞是什么细胞 正常和一般疾病病人的骨髓片中可以看到原始细胞吗 在什么情况下，骨髓片中能看见大量的原始细胞 如何鉴别原粒、原淋及原单？ 过氧化物酶（POX）染色 （1）染色方法及原理 复方联苯胺法 二氨基联苯胺法 四甲基联苯胺法 改良Pereira法（碘化钾法） （2）正常血细胞的染色反应 染色成功的标志：成熟中性粒细胞为阳性反应 各系细胞染色反应 粒系：除早期原粒外，其余为阳性 单核系：除早期原单外，其余为弱阳性 淋巴系：阴性 浆细胞系、红系、巨核系：均呈阴性 【苏丹黑B染色（SBB染色）】 （1）染色方法及原理 （2）正常血细胞的染色反应 （3）临床应用 同POX染色。POX更特异，SBB更敏感 特异性酯酶染色（氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色，CE染色） （1）原理及方法 （2）正常血细胞的染色反应 染色成功的标志：成熟中性粒细胞为阳性反应 各系细胞的染色反应 粒系：早期原粒为阴性，其余为阳性 单核系：阴性 淋巴系：阴性 浆细胞系、红系 、巨核系：均为阴性 非特异性酯酶染色 （1）染色方法及原理：需同时进行NaF抑制试验 （2）各系血细胞的染色反应 粒系：多为阴性，少数可呈阳性，阳性反应不能被NaF抑制（ α-NBE染色特异性较高，粒系为阴性 ） 单核系：早期原单为阴性，其余为阳性，阳性反应可被NaF抑制 淋巴系：多为阴性，少数可呈弱阳性，阳性反应不能被NaF抑制 其他细胞 【酯酶双染色】 染色原理及方法：在同一张涂片上进行特异性酯酶染色和非特异酯酶染色 CE染色与α-NAE染色 CE染色与α-NBE染色 各系血细胞的染色反应 临床应用：对AML-M4的诊断具有意义 过碘酸-雪夫反应（PAS染色，又称糖原染色） （1）染色方法及原理 细胞内含有乙二醇基的糖类在过碘酸氧化作用下产生双醛基，后者与雪夫（Schiff）染料作用，使无色品红变为紫红色物质沉积，定位于含有多糖成分的部位 （2）正常血细胞的染色反应 染色成功的标志：成熟中性粒细胞为阳性反应 各系血细胞的染色反应 粒系：早期原粒阴性，其余为阳性，呈弥散状阳性