Iux标记毒死降解菌β菌株和土壤中定殖动态研究.pdfVIP

二 0IIII I I IlllI[III IllIIII 6 Y173521 摘 要 本实验从农药生产废水的污泥中驯化、分离出一株能够稳定降解毒死蜱的菌株B 菌株，通过菌落的形态特征和菌株16SrRNA分析，将该菌株鉴定为微嗜酸寡养单胞 菌(Stenotrophomonas 察存活能力和对毒死蜱的降解效应，为进一步构建高效稳定的基因工程菌提供参数。 实验结果如下。 1．经分离和定向筛选，获得3株具有降解毒死蜱能力的菌株，在相同的接菌量下， 蜱的降解率分别为15．7％、30．5％、14．O％。选择降解率最高的B菌株作为进一步研究 laL菌液时， 对象，在毒死蜱浓度为10mg·L-1，5mL降解体系中添加19／L蛋白胨，500 菌(Stenotrophomonasacidaminiphila)。 102个转化 浓度16．5lag·mL1，电压2．5kV，电击时间3ms时的转化率最高，可达2．73x 发光活性和对Km的抗性，说明质粒pTRl02在转化子中可以稳定遗传。 3．分别测定了转化子Lux．B和B茵的最优生长条件、生长曲线和对毒死蜱的降解 生长最快；二者的生长趋势没有差异，0．3h为延滞期，3．12h为对数生长期，之后进 入稳定期和衰亡期；将培养了12h的转化子Lux．13和B菌液取出，当毒死蜱浓度为 子对毒死蜱的降解能力比出发菌株提高了近一倍。 4．设置了未灭菌土+毒死蜱20 mg·kgJ+Lm【．B，灭菌土+毒死蜱20mg．kg。1+￡，m【．B， 未灭菌土+Lux．B，灭菌土+Lux—B，未灭菌土+毒死蜱20 mg·kg～，灭菌土+毒死蜱20 mg·kg_6个处理，考察了转化子Lux．B在土壤中的竞争能力和毒死蜱的降解能力。结 果表明，Lux．B在土壤中的数量变化规律是先上升后下降，但是在灭菌土壤中的下降 趋势较为缓慢，数量比较稳定，在未灭菌土壤中下降的趋势较快这说明土著微生物对 外来微生物的生存影响较大，并且在加毒死蜱的处理组中Lux-B数量多于不加毒死蜱 的处理组数量，说明Lux．B能够以毒死蜱为营养物质生存；未灭菌土+毒死蜱20 mg·k91+Lux．13处理组中毒死蜱降解速率最快，其次是灭菌土+毒死蜱20 mg·kg～+Lux．B，再次是未灭菌土+毒死蜱20mg．k茁1，灭菌土+毒死蜱20mg·k91组降 解最慢，说明微生物对毒死蜱的降解起着重要作用，并且Lux．B对毒死蜱的降解作用 强于土壤中的土著微生物，二者可以产生协同作用共同降解毒死蜱。 关键词：毒死蜱，微生物降解，B菌，Lux—B，发光酶基因，土壤定殖 Ⅱ Abstract 13 Inthis stable strainwasscreenedandisolatedfrom study,achlorpyrifos-degrading of wasidentifiedas productionwastewater,which sludgepesticide characteristicsand16SrRNA throughmorphological acidaminiph