PantoeaagglomeransKFS胞外多糖抗辐射性能及其结构分析.pdfVIP

II 万方数据 III 万方数据 Pantoea agglomerans KFS 胞外多糖抗辐射性能 及其结构分析 摘要 本论文对从深圳红树林中分离筛选出的一株具有抗辐射活性的成团泛菌胞 外多糖的活性及其结构进行了研究。论文首先评价了该胞外多糖对细胞的辐射损 伤保护作用并初步探索了其保护机制以及多糖的体外吸湿保湿性能；以胞外多糖 产生量为指标，对该菌液体发酵产胞外多糖的培养条件进行了优化；采用高效凝 胶渗透色谱法、气相色谱法、酶解法、液质联用技术对该胞外多糖的结构进行了 分析；在此基础上主要研究内容及结果如下： （1）利用单因素和响应面试验对发酵多糖的培养条件和营养成分进行优化。 通过单因素实验确定了Pantoea agglomerans KFS发酵产胞外多糖的最优条件为初 始pH 8.0 ，装液量100 mL/250 mL，接种量5%，培养温度26 ℃，转速190 rpm。利 用单因素和响应面相结合的优化方法获得最佳培养基组成为：蔗糖 56 g/L, 蛋白 胨 3.5 g/L，ZnSO 0. 2 g/L，KH PO 1 g/L， (NH ) SO 3 g/L，在上述条件下培养 4 2 4 4 2 4 48 h，所得产量为17.03 g/L。通过测定发酵曲线得到该菌株产糖量在45 h时达到最 高，为24.95 g/L 。经优化将发酵液浓缩至原体积的1/2后，pH 自然，添加1.5倍乙醇 沉糖，冷冻干燥后得到多糖粗品。此法制备的多糖经Sephacryl S-400HR柱层析获 得分子量均一的多糖纯品。 （2 ）多糖结构解析。通过高效凝胶渗透色谱法确定了P. agglomerans KFS胞外 多糖的重均分子量为679 kDa ，糖醇乙酸酯气相色谱显示EPS 由甘露糖和葡萄糖以 4 ：3 的比例构成。经过专一性酶降解EPS ，取分级醇沉后的产物进行ESI-LC-MS 分析，初步确定该多糖的基本结构单元是由甘露糖和葡萄糖间隔排列的一个七糖 单位，且端基甘露糖上存在一个丙酮酸乙酯取代基。讨论了多糖结构与抗辐射活 性之间的关系，为该多糖在抗辐射领域的应用提供了理论依据。 （3 ）P. aggressive KFS胞外多糖的抗辐射活性以及作用机制研究。结果表明胞 外多糖对细胞的保护作用与糖溶液浓度和紫外辐照时间呈相关性。当糖溶液浓度 为4 mg/mL，紫外辐照5 min时，大肠杆菌、白色念珠菌以及金黄色葡萄球菌的存 活率分别是48.49%、36.73%、47.5% ，明显高于空白对照组13.68%、13.47%、12.25%。 I 万方数据 为了进一步探究多糖抗辐射机制，考察了胞外多糖的抗氧化活性并进行紫外光谱 扫描，试验结果表明多糖具有很强的体外清除氧自由基的活性。在试验条件下清 除羟自由基、DPPH 自由基以及超氧阴离子自由基的EC50 分别为4.1 mg/mL 、7.5 mg/mL 以及38 mg/mL 。在200-400 nm光谱范围内多糖没有特征吸收峰，在波长﹤ 370 nm范围内，多糖溶液能透过大约80%的紫外光。结合当前对抗辐射物质作用 机制的研究，可以初步判定多糖是通过清除紫外辐照产生的氧自由基达到保护细