法夫酵母虾青素酵条件的优化及提取与分析研究.pdfVIP

摘要 摘要 素类物质，在生物体内虾青索具有抗氧化、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老、提高免疫力、抗 光敏作用及显色等多种生物学功能，在食品、医药、化妆品、饲料等行业中有广泛地需 求。法夫酵母是一种重要的天然虾青素资源，为了利用法夫酵母生产天然虾青素，本课 题对法夫酵母虾青素的分析及提取方法、法夫酵母突变育种、虾青素的累积模型、培养 基、培养条件进行了研究，并对高产虾青素的法夫酵母突变株的发酵经济学进行了初步 的评价。 nm，13．胡萝 在丙酮二甲亚砜混合溶液中，虾青素的最大吸收波长范围为470—490 }素的最大吸收波长范围为450--465lira。以虾青素为标准样，487nlll为测定波长，利 7．00％。该法能快速、准确地测定法夫酵母的总类胡萝h素含量。 在很大的波长范围内，虾青素和B一胡萝h素的分光光谱严重重叠，用传统的分光 法不能分别定量法夫酵母中的虾青素素和B一胡萝h素。比导数光谱法是近年来发展起 来的一种新型分光分析方法，它可以消除混合物中结构类似物的干扰。利用比导数光谱 法测定虾青素的波长为466llm，求导间隔为2nm，除数因子为2mgn；测定13．胡萝h 素的波长为461rim，求导间隔为2ilm，除数因子为2mg／l。在此条件下，虾青素和13一 差都小于5％。该法适用于快速对大量法夫酵母样品的虾青素和B一胡萝}素进行定量 分析。 法夫酵母含有多种类胡萝b素成分，利用色谱方法可以同时对多种类胡萝p素组分 进行分析测定。薄层色谱是一种快速、微量的分析方法，适用于硅胶薄层分析法夫酵母 类胡萝h索的溶剂极性为1，45左右，乙醚、三氯甲烷、二氯甲烷三种极性混合溶剂的比 VIⅡ 摘要 谱类胡萝h素分析方法的准确性与精密性都达不到定量分析的要求，只适用于对法夫酵 母的类胡萝}素进行定性分析。 C。8反相柱分析测定法夫酵母类胡萝h组成的有机相是甲醇、四氢 适用于Novapak 呋喃和乙腈I：I：I的混合液；当流动相的流速为1．2 到100％后在4 min内降到0。在此色谱条件下，虾青素和B．胡萝h素标准衄线的回归 O．07％～0．62％$n O．21％～0．78％。该法适用于对法夫酵母类胡萝h素样品进行精确分析 和法夫酵母菌种的鉴定。 法夫酵母类胡萝b素是胞内成分，要对其进行分析首先要对法夫酵母进行破壁提取 处理，二甲亚砜是最有效的破壁溶剂，用氯仿和丙酮可以高效地把类胡萝h素从二甲亚 砜破壁后的法夫酵母细胞中提取出来。优化的二甲亚砜法破壁法夫酵母提取类胡萝h素 素，适用于分析测定法夫酵母中的类胡萝h索成分。 酸法破壁法夫酵母提取虾青素不存在残留毒性，提取出的虾青素能满足满足食品及 药用的需求。用乳酸对法夫酵母进行破壁处理既能取得较好的破壁效果，又不会使虾青 素发生剧烈的降解，提取效果最好。乙醇和丙酮都能高效地从酸破壁后的法夫酵母中浸 提出虾青素，但乙醇的安全性更高，不存在残留毒性问题。用响应面分析法优化得到的 乙醇加量为20．25m1幢，浸提时间3min。 用硫酸二乙酯对法夫酵母进行诱变育种，当诱变温度为20℃时，应控制诱变时间在 5min左右。运用薄层色谱对突变株进行初步分型与筛选，可以大大地提筛选效果。用 液相色谱对初筛后的突变株复筛，鉴定出了四株高产突变株及与一些类胡萝h素组成缺 陷型突变株。 IX 摘要 虾青素是高产虾青素的法夫酵母7812株的次级代谢产物，在对数生长期及稳定前 期，虾青素积累与细胞生长间的关系模型为y=o．0113x+0．0717，属部分生长关联型。 不同金属离子对法夫酵母具有不同的影响，在培养基中添加zn2+和Mn2+能增加细 u 添加F矿+和cu2+能使细胞中虾青素的含量增加。在培养基中添加3mol