桑叶多酚氧化酶的提取、纯化及其固定化的研究.pdfVIP

桑叶多酚氧化酶的提取、纯化及其固定化研究 摘要 本文以桑叶为研究对象，研究桑叶多酚氧化酶的提取、分离纯化以及 对其固定化的研究，为揭示桑叶多酚氧化酶性质，进一步开发利用桑叶多 酚氧化酶奠定了初步基础。主要研究内容与结论如下： 考察匀浆浸提法、超声波辅助浸提法、丙酮辅助提取法三种方法对桑 叶多酚氧化酶进行提取，确定丙酮辅助法作为最优提取方法。根据正交试 验得出提取工艺条件为：提取时间为3小时，加入的料液比为1：20，提取pH 为6．5。 确定桑叶多酚氧化酶的纯化工艺。采用丙酮辅助法提取的桑叶多酚氧 化酶，然后经40％至80％硫酸铵沉淀，透析、浓缩过后的蛋白酶采用阴离 子交换中压层析系统进行纯化分离，结果显示3号峰为桑叶多酚氧化酶蛋 确定桑叶多酚氧化酶的固定化工艺。试验筛选出海藻酸钠作为多酚氧 化酶较优的固定化载体，通过正交试验得出最佳固定条件为：采用5％的海 h， 藻酸钠，在1．5％的氯化钙中固定2．5h，然后用0．2％的戊二醛交联2．5 得出的最高酶活回收率为85．6％。进一步采用磁性四氧化