AtTPS03因RNA干扰载体的构建与转化拟南芥的研究.pdfVIP

摘要 罗勒烯是一种单蘸挥发性有机物，在植物被取食或者受机械损伤从叶中散发 出来，也是一种花香物质。空气传播的罗勒烯能作为一种气传信号分子，在不同 的生物体之间起着化学通讯的作用。AtTPS03是AtTPS基因家族中～种萜烯合 萜合酶，这种单萜合酶能高特异性催化香叶基二磷酸成罗勒烯。此外，暴露植物 到罗勒烯能激发植物防御基因的表达。刘春林等发现B一罗勒烯能诱导完整植 物中与水杨酸和茉莉酸有关防御基因的表达，而且发现罗勒烯能解除水杨酸和茉 莉酸的拮抗作用。AtTPS03对植物的生长发育、生理生化、抗性等是否还有其他 的调控作用，我们通过RNAi技术进行了探索。RNAi技术是近几年发明的一种 新兴技术，它能高效特异抑制相关基因的表达。我们根据RNAi的基本原理，构 建了特定的表达载体，然后转入到拟南芥。期望使AtTPS03基因表达的效率大 大降低，甚至导致其完全沉默。这样我们就有可能得到一些突变体，然后由其突 变的表型推测AtTPS03基因对植物的生长发育、生理生化、抗性等的调控作用。 主要的结果如下： 1．AtTPS03基因片断的克隆与序列分析 序列的同源性为99％，因此可以用来构建干扰载体。 2．AtTPS03基因干扰载体的构建 PCR、质粒PCR、酶切等进行验证，发现正反向基因片段均己插入到了载体 当中，这样干扰载体就构建成功。 3．遗传转化 我们通过根癌农杆菌LBA4404的介导作用，把构建好的干扰载体转化到 拟南芥。对于转化子的筛选，我们先用野生哥伦比亚型拟南芥探索到最佳筛 选的PPT浓度为3．Om∥L。当用PPT对转化种子进行筛选时，发现25株转化 苗在PPT的浓度为3．0 mg／L的MS培养基上能正常生K，对PPT具有抗性。 通过序列比对发现，拟南芥中无质粒pFGC5941内含子的同源序列，因此，对 的内含子序列加2AtTPS03基因片断大小一致，说明干扰载体已经转入到了拟 南芥中。 关键词：RNAi拟南芥 AtTPS03基因 Abstract (E)一B--Ocimeneisoneofthemost found ofthe commonlymonoterpenes volatileblendsthatareemittedfromleavesin to herbivoresor responsedamageby scents． mechanical isalsoa floral wounding．(E)一B一0cimenecomponentofmany from canserveasa forthe emitmd chemicalcue Airborne(E)一B—Ocimeneplants an attraction or herbivoresandalsoas attraetantfor predatorsof#ant ofparasitoids as insects．AtTPS03WasidentifiedamemberoftheAtTPS pollinating large gene describetheisolationoftheeDNAofthe terpene fami