BADH和CM基因的无选择标记表达载体转化玉米的研究.pdfVIP

BADH和CMO基因的无选择标记表达载体转化玉米的研究 摘 要 玉米是重要的粮食和饲料作物，也是现代食品、医药、化学工业的重要原科作物， 玉米是对盐分中度敏感的作物，土壤干旱、盐碱胁迫是降低其产量的主要环境因素之一， 因此，培育耐盐玉米品种具有重要的意义。采用传统的育种方法选育抗旱耐盐品种极为 缓慢。随着分子生物学技术的发展，利用基因工程技术培育抗逆植物新品种己成为21 世纪农业发展的一个重要方向。目前，多数植物的遗传转化都要使用选择标记基因，诸 如抗生素或除草剂抗性基因等来筛选转化子，虽然仍无直接研究结果表明选择标记基因 影响人类健康或环境安全，但引起了人们对转基因产品安全性的担心。为了消除转基因 作物的安全性顾虑，无选择标记转基因植物应运而生。本实验采用无选择标记的BADH 和CMO基因表达载体转化玉米，为培育出具有安全、高度耐盐碱的玉米新品种打下良好 基础。 本文采用玉米常用自交系为受体材料，对胆碱单加氧酶基因(cMo)和甜菜碱醛脱 氢酶基因(BADH)的无选择标记表达载体转化玉米进行了研究，鉴定了玉米愈伤组织及 苗耐盐碱性敏感性，确定玉米愈伤组织及幼苗盐临界浓度，对已转化的愈伤组织及幼苗 进行筛选和几项重要生理指标的鉴定。评价转BADH和CMO基因玉米耐盐碱的能力。取 得的主要研究结果如下： 1．进一步优化了农杆菌介导的玉米愈伤组织转化条件 以普通玉米自交系H99和P：的胚性愈伤组织为材料，利用农杆菌介导法将BADH和 CMO基因导入玉米自交系中，研究农杆菌转化系统的优化。结果表明，浓度(OD值)在 0．5-0．6左右，侵染25分钟时的愈伤组织的侵染效果最好，转化率达到4．0％。 2．利用农杆菌介导法把BADH和CMO基因转入玉米，获得了转基因植株。 将转化的愈伤组织进行分化出苗后进行MR、Southern杂交，证明外源目的基因已 整合到玉米基因组中。 3．利用花粉管通道法把卧DH和CMO基因转入玉米，获得了转基因植株。 采用了花粉管通道法对玉米自交系进行遗传转化。将抗盐基因转入玉米自交系030、 吉农201和父本l中，并从中得出花粉管通道法的最佳转化条件。用SSC溶解的质粒， 导入间隔时间要在8—20小时范围内，并且导入质粒的浓度为500且g／zL、导入量为200 u 基因已整合到受体植株的基因组中，并在后代中得以表现。 4．确定玉米愈伤组织盐筛选临界浓度为32mmol／L，幼苗盐筛选临界浓度为1．096。 5．对转BADH和CMO基因幼苗耐盐性相关生理指标进行了鉴定 所测的耐盐性生理指标为细胞膜透性、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性以及过氧 化物酶活性。对转化苗在浓度为1．o％的盐水浇灌条件下，定期测其生理指标，并与非转 化苗的指标作对比，发现其细胞膜透性、丙二醛含量有着明显的降低，而超氧化物歧化 酶活性以及过氧化物酶活性有明显的提高。 关键词：玉米，遗传转化．无选择标记．耐盐筛选，生理指标 n of ofmaizewith vector Researchontransformationmarker-free expression BADHandCMO genes Abstract usedas L，1isa used越foodandfcedstuff．Anditalsocanbe Maize(Zea veryimportantcrop mays raw fields．Maizeisn whichmiddlesensiti