沉淀反应与凝集反应.ppt

免疫学及免疫学检验 沉淀反应 （precipitation reaction) 毛旭虎 医学检验系临床微生物学及免疫学教研室 二OO二年三月 免疫学及免疫学检验 可溶性抗原+相应抗体 肉眼可见的沉淀 免疫学及免疫学检验 1897年 Kraus 就发现细菌培养液（毒素）与相应 抗血清混合出现沉淀 1905年 Bechhold 把抗体放在明胶中，将抗原加于 其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行 1946年 Oudin 报告了试管免疫扩散技术 1965年 Mancini 提出单向免疫扩散技术，使定性 免疫试验向定量化发展 免疫浊度法的出现，使沉淀反应达到快速、 微量、自动化的新阶段。 免疫学及免疫学检验 根据沉淀反应的介质和检测方法的不同,沉淀反应可分为: 液相内的沉淀反应 凝胶内的沉淀反应 免疫学及免疫学检验 (一) 原理 把抗原溶液小心地加于已含抗体溶液的细试管液面上。当对应的抗原与抗体相遇，在界面处形成清晰的乳 白色沉淀环。 免疫学及免疫学检验 (二) 操作步骤 1. 用毛细滴管吸取抗血清加于沉淀管(内径 约1.5~2mm)底部，避免产生气泡。 2. 将抗原溶液沿管壁缓缓叠加于抗血清液面上，形成清晰的交界面。 3. 置沉淀管于室温下使其反应，1~5min内 在两界面间呈现乳白色沉淀环为阳性。30min仍无沉淀环出现则为阴性。 免疫学及免疫学检验 (三) 方法评价 该试验是经典的血清学反应之一，简便、快速、实用。故用于鉴定血迹和诊断炭疽(Ascoli试验)。只能定性，不能定量、敏感性较低(3~20mg/L)，对含有多个抗原抗体对的反应系统缺乏分辨力。方法难以推广。 免疫学及免疫学检验 三、免疫浊度试验 经典的免疫沉淀试验是抗原和相应抗体在反应终点时判定结果，方法有耗时、敏感度低(10~100mg/L)和不能自动化等缺点。70年代以来，根据抗原和抗体所在液相内快速结合并产生浊度的原理，建立了免疫比浊法。临床常用3种微量免疫技术，即透射比浊法(transmission turbidimetry)、散射比浊法(nephelometry)和免疫胶乳比浊法(immunolatex turbidimetry)，借助多种自动化分析仪器来完成。 免疫学及免疫学检验 (一) 透射比浊法 1. 原理 抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物(IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减少，免疫复合物量越多，透射光越少，即光线吸收越多，可用吸光度表示。吸光度和复合物的量成正比，当抗体量固定时，与待检抗原量成正比。用抗原标准品建立标准曲线，可测出待检抗原含量。 免疫学及免疫学检验 2. 操作步骤 (1) 用稀释缓冲液将待检样品和标准品按规定稀释，取一定量加至测定管中。 (2) 加最适工作浓度(用方阵法预先滴定)的抗体，孵育一定时间，测定吸光度(A)值。 (3) 以不同浓度抗原含量为横轴，吸光度为纵轴，绘标准曲线。从标准曲线可得待检抗原量。 免疫学及免疫学检验 3. 方法评价 敏感度高于单相琼脂扩散试验5~10倍，批内、批间重复性较好，变异系数10%，操作简便快速，1h可报告结果。 免疫学及免疫学检验 (二) 散射比浊法 散射光系指一定波长的光沿水平轴照射，碰到小颗粒的免疫复合物，光线被折射，发生偏转，这种偏转的角度可因光线波长和颗粒大小不同而有所区别。散射浊度法是在入射光的一定角度检测粒子发出的散射光，散射光的强度与复合物