基底硬度及细胞度对骨髓间充质干细胞骨分化的影响及机理研究.pdfVIP

Effects of Matrix Elasticity and Cell Density on Human Mesenchymal Stem Cells Osteo/Chondro Differentiation and Mechanism Study A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for the Doctor ’s Degree of Engineering By Ruyue Xue Supervised by Prof. Li Yang Assistant Supervised by Prof. Shu Chien Specialty：Biomedical Engineering College of Biogineering of Chongqing University, Chongqing, China April 2013 中文摘要 摘 要 骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells, MSCs ）作为成体干细胞中最重要 的一种，是一类具有多向分化潜能 （Multiple differentiation potentiality ）的细胞， 能够向神经细胞，肌细胞，成骨细胞，软骨细胞以及脂肪细胞等方向分化。因其 多向分化的能力MSCs 已成为组织再生、修复的重要种子细胞来源。目前的再生医 学研究认为MSCs在心肌细胞受损后、脊髓损伤、骨损伤等组织修复和再生工程中 发挥重要作用。然而，组织修复与再生研究中所用的生物材料的物理特性及细胞 周围微环境，尤其是基底硬度对MSCs定向分化方面的作用机理，至今仍不明了。 在组织修复与再生研究中，MSCs 的定向诱导分化尤为重要，研究证明在复杂 的组织微环境中，影响MSCs分化的因素不仅包括被广泛研究的生物化学因素，还 包括传导力学信号的生物物理因素。不同的基底材料硬度 （Matrix stiffness ）和接 种的细胞密度 （Cell density）是否会调节MSCs分化以及如何影响其分化尚不清楚。 本文着重研究基质硬度对MSCs 向成骨和软骨分化的影响，在此基础上探讨不同细 胞密度对其分化的影响，继而研究哪条信号通路在基底硬度诱导MSCs 向成骨分化 过程中起主要调控作用。本文的主要研究工作和结果如下： 1. MSCs细胞形态和增殖对基底硬度及细胞密度的响应 通过改变丙烯酰胺（Acrylamide ）和甲叉双丙烯酰胺（Bis-acrylamide ）的比例， 使材料物理硬度控制在约0.5至100千帕之间。软基底上MSCs贴壁面积仅为硬基底 2 上的40%且应力纤维少而弱。细胞在软硬凝胶上以低密度（1,000个/cm ）和高密度 2 （20,000个/cm ）培养，结果显示，在低密度培养时，软基底显著抑制MSCs 的增 殖速度，且在软基底上P-Rb, P-P70显著降低，P27显著升高；高密度培养时，软硬 基底对细胞增殖造成的差异消失。以上实验说明细胞增殖与基底硬度有关，但在 高密度培养时，基底硬度对细胞增殖的影响消失，软硬基底上的细胞增殖没有显 著差异。 2. 基底硬度和细胞密度对MSCs成骨和软骨分化的影响 成骨分化的标记基因Alkaline Phosphatase (ALP), Type I collagen, alpha1 (Col1α1)，Runt-related transcription factor 2 (