山东大学研究生国家精品课程PCR原理及应用创新.pptVIP

聚合酶链反应Polymerase chain reaction（PCR）  概 述 聚合酶链反应（PCR）是一种在体外扩增特定基因或DNA序列的方法，又称基因体外扩增法，具有特异性、高效性和高度准确性三大特点。 发展简史 常规多聚酶链反应 常用的几种PCR技术 PCR的应用 一、发展简史 1985年：美国PE-Cetus公司的Mullis首次发明了PCR技术，采用的是大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow大片段 1988年初：Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR反应 1988年：Sarki 利用从水生嗜热杆菌（Thermus aquaticus)中提取的耐热DNA多聚酶----TaqDNA多聚酶进行PCR研究 二、常规多聚酶链反应 （一）基本原理： PCR是体外酶促合成特异DNA片段的方法。由高温变性、低温退火及适当温度延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA片段得以迅速扩增。 变性----退火----延伸----延伸 由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成： ①模板DNA的变性：dsDNA ssDNA ②模板DNA与引物的退火(复性)：引物与模板DNA的互补序列配对结合 ③引物的延伸：DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为原料，以靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条