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白僵菌RAPD-PCR反应体系优化研究 魏晓鹏 李会平* 黄大庄 （河北农业大学林学院，河北保定 071000） 摘 要 为了建立一套适宜于白僵菌退化研究的RAPD-PCR反应体系及反应程序，通过采用L16(45)正交试验及退火温度和循环次数的单因素优化对反应体系中的各因素进行优化组合。结果表明，20uL PCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为：10×Buffer 2μL,MgCl2(25mmol/L)2.4uL,四种dNTP(各2.5mmol/L)0.8uL,随机引物(10μmol/L)1.4uL,TaqDNA聚合酶(5U/uL)0.4uL,模板DNA (10 ng/uL)1uL。反应条件为94℃预变性2min, 94℃变性30 s, 38℃退火40 s, 72℃延伸1min,循环次数40次, 72℃延伸5min。 关键词 白僵菌；RAPD-PCR；正交组合；反应体系；退火温度；循环次数 中图分类号 文献标识码 B 文章编号 The research of RAPD-PCR reaction system of Beauveria bassiana WEIXIAO-Peng LIHUI-Ping HUANG Da-Zhuang （Agricultural University of Hebei, Baoding Hebei 071000，China） Abstract In order to establish optimal PCR (polymerase chain reaction) system and procedure for studying the degradation of Beauveria bassiana, By using L16 (45) orthogonal experiment and the single factor of the annealing temperature and recycle number for the optimized combination of factors of reaction system optimization. Results show that the optimum combination of all factors in 20uL polymerase chain reaction (PCR) system and response procedures include 2μL of10×Buffer, of 2.4uL MgCl2(25mmol/L), 0.8uL of four dNTPs(each 2.5mmol/L), 1.4uL of random primer (10μmol/L), 0.4uL of Taq polymerase(5U/uL), 1uL of template DNA(10 ng/uL). Reaction conditions is Pre denaturation temperature as 94℃ for 2min, denaturation temperature as 94℃ for 30 s, annealing temperature as 38℃ for 40 s, extensions temperature as 72℃ for 1min, recycle number for 40 times, extensions temperature as 72℃ for 5min. Key words Beauveria bassiana;RAPD-PCR; Orthogonal combination; Reaction system; temperature; number 收稿日期： 接受日期：资助项目：作者简介：（198－），，河北，硕士研究生。 E-mail：通信作者：，教授，生导师。 E-mail：@ 近年来，随着国家大力倡导林业生产的可持续发展,在林业病虫害防治中，生物防治越来越受到重视。白僵菌Beauveria bassiana作为当前世界上研究和应用最多的一种广谱虫生真菌，其致病力强，杀虫谱广，对温血动物和植物无害且容易培养。我国南至海南、北抵黑龙江都有白僵菌的分布，应用白僵菌防治农、林害虫的种类和面积均居世界首位，防治害虫种类达40种以上，年防治面积达67万hm2，在控制森林害虫的严重发生和减少环境污染方面，发挥着不可替代的作用[1]。 然而在研究和应用过程中，菌株继代培养一定代数后经常出现生产性状的退化，如产孢量减少、杀虫毒力降低等。目前对菌株退化的研究主要集中在菌落局变、产孢量、杀虫毒