12 基因工程的基本操作程序.pptVIP

* 新课导入 外星来客？？？ 虎蚕 白斑马 你是否相信？ 普通玉米 有抗虫基因的玉米 1.2 基因工程的 基本操作程序 重点 难点 教学重难点 基因工程的基本操作程序的四个步骤 。 从基因文库中获取目的基因。 利用PCR技术扩增目的基因。 基因工程的基本操作程序 一 目的基因的获取 二 基因表达载体的构建 三 将目的基因导入受体细胞 四 目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 将需要的基因从供体 生物细胞内提取出来 即： （3）获得目的基因的方法： 1、从基因文库中获取目的基因 2、 利用PCR技术扩增目的基因 1.1什么是基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，成为基因文库。 1.2基因文库的种类 基因组文库： 部分基因文库(cDNA文库)： 含有一种生物的全部基因 含有一种生物的部分基因 1、从基因文库中获取目的基因 1.3基因文库的构建 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 某种生物的mRNA 单链互补DNA 双链cDNA片段 导入受体菌中储存 与载体连接 cDNA文库 逆转录 构建基因组文库 构建部分基因文库 1.4怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因 根据目的基因的有关信息，如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA，以及基因的表达产物蛋白质的特性来获取目的基因。 2、利用PCR技术扩增目的基因 2.1 PCR技术(聚合酶链式反应)原理： DNA双链复制的基本原理。 2.2 PCR技术反应前提： PCR扩增仪 一段已知目的基因的核苷酸序列，根据这一序列合成引物。 引物？ 四种脱氧核苷酸 一对引物 热稳定DNA聚合酶(Taq酶） DNA的两条链为模板 温度控制和缓冲液 2.2 PCR技术反应条件： 5/ 3/ G—G T—C 3/ 5/ G—A C—C 5/ 3/ 引物Ⅱ G—G 复性 延伸 5/ 3/ A—G 引物Ⅰ 目的基因DNA受热解成单链 变性 引物与单链互补结合 合成链受DNA聚合酶的作用 2.3PCR技术反应过程： 质粒 DNA分子 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA 连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 限制酶 二、基因表达载体的构建 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 （1）重组质粒的形成： 载体的作用：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 （2）基因表达载体的组成： 有人采用总DNA注射法进行遗传转化，即将一个生物中的总DNA提取出来，通过注射或花粉管通道法导入受体植物，没有进行表达载体的构建，这种方法针对性差，完全靠运气，也无法确定什么基因导入了受体植物。此法目前争议颇多，严格来讲不算基因工程。 将目的基因直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？ 三、将目的基因导入受体细胞 （1）常用的受体细胞： 动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。 （2）将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 转化 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射法 感受态细胞吸收DNA分子 （3）将目的基因导入受体细胞的方法： 3.1导入植物细胞 农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物。 Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上。 农杆菌转化法 农杆菌转化法示意图 目的基因的遗传特性得以维持稳定和表达 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上 农杆菌导入植物细胞 整合到受体细胞的染色体上 农杆菌转化法 花粉管通道法 基因枪法 提纯含目的基 因的表达载体 取出卵细胞 显微注射 受精卵移植入 输卵管或子宫 发育成具新性状的动物 3.2导入动物细胞 显微注射技术 将目的基因导入动物细胞 *