棉花bac-fsh体系的建立及其初步应用.pdf

摘 要 助于BAC—FISH技术，以染色体特异的BAC探针标记特定染色体，以适宜的时期的分裂相(有丝 分裂中期或减数分裂粗线期)进行核型分析，有望解决以往棉属染色体核型分析的种种困难，进 一步确定与连锁群对应的棉属染色体物理序号。这对棉花育种研究具有重要的理论和实践意义。 本研究的实验结果总结如下： 1、为获得染色体特异的BAC探针，本研究构建了基于菌液PCR和二维交叉实验的BAC文库筛 标记。 DNA 2、成功构建了BAC—FISH技术体系，探讨了BAC．HSH技术的关键步骤，包括BAC 探针的纯度和浓度；探针的标记方法和标记时间：探针和染色体DNA杂交时，靶DNA的变 性条件；BACDNA中重复序列的封阻方法和封阻条件等。 3、筛选出含有近着丝粒的SSR标记的BAC克隆，获得了两个棉花着丝粒相关探针：BAC 组着丝粒探针，但在A(亚)组着丝粒处无明显信号；后者在四倍体A亚组着丝粒处信号较 强，在D亚组着丝粒处有微弱信号。 4、筛选出含有近端部的SSR标记的BAC克隆，获得了一个棉花端粒相关探针：BAC克隆 148C1。该探针在四倍体A亚组染色体上杂交信号较强且覆盖了染色体的末端，在四倍体D 亚组染色体部分染色体上仅末端有杂交信号；该探针与二倍体A组染色体的BAC．FISH图像 显示，染色体末端的杂交信号明显强于中部。 获得特异信号的两种情况：一是BAC探针来源D亚组染色体；二是BAC探针来源染色体高 度重组区即染色体端部。个别BAC探针的杂交结果还显示出其含有的重复序列有些是基冈组 特异的，等等。 6、四倍体中期染色体BAC．FISH图像的核型分析初步探讨结果显示：BAC信号的产生使得 进行中期染色体同源配对相对容易，但仍然不能克服棉属染色体个体小、形态相近造成的染 色体排序的困难。针对这些困难，本研究提出了核型分析的建议。 关键词：海岛棉，荧光原位杂交，细菌人工染色体，核型分析，着丝粒，端粒 Abstract artificialchromosome—_fIuorescenceinsitu been Bacterial inrecent asakindofmolecularcell based developedyears biologytechnology．Thekaryotypeanalysis willresolvedifficultiesintraditional of itCan onBAC—FISH many karyotypeanalysisGossypium．And the numberofthechromosome to identifyphysical correspondinglinkagemapbyusing BACas to withwell chromosomesin chromosome-specialprobeshybridize spreading appropriate inmitosisor in ofBAC—FISHhasbeenconstructed periodfmetaphase pachytenemeiosis)．nesystem the numberofthe to inthis to chromosome identifyphysical correspondinglinkagemap． paper res