猕猴桃属植物的传多样性及种质超低温保存研究.pdf

猕猴桃属植物的遗传多样性及种质超低温保存研究 摘 要 中国是猕猴桃属植物的起源和分布中心，种质资源极为丰富，可为猕猴桃遗 传改良和资源利用提供广泛的背景材料。长期以来，对猕猴桃属植物的遗传多样 性尤其是DNA水平上的遗传多样性及种质的超低温保存缺乏系统研究。鉴于此， 作者以重要分布区之一的江西猕猴桃属植物为对象，在查清其种类、分布及若干 性状评价的基础上，进行AFLP分析与种质超低温保存的研究。主要结果如下： l江西猕猴桃属植物的分布及若干性状评价 况进行系统研究，基本查清了其分布种类及规律。结果表明，江西境内分布有猕 猴桃属植物20种1l变种，其中葛枣猕猴桃∞ctinidicL Zuee．)Maxim．)、灰毛猕猴桃似．cinerascens vatcuneata C．ELiang)为江西首次发现。 C．ELiang)和簇花猕猴桃∽．fasciculoides 依据其种类与变种的多样性形态特征，编制了江西猕猴桃属植物分类检索表。 (2)江西猕猴桃属植物的地理分布区域较广，中华猕猴桃在全省各地均有分 布，各种类与变种之间对气候及土壤等生态条件要求的多样性导致其地理分布的 广泛性。其区系特征主要表现为：种类丰富，特有现象较明显，江西分布国有特 产种17种，占国产该属特有种的30．4％，其中有2种为江西特有；种间、种内 分化较强烈，江西猕猴桃属植物的种与变种在该属4个组均有代表；与邻近地区 猕猴桃属植物的关系密切，其中与福建关系最为密切。 (3)通过对主要种与交种果实性状观测、营养成分和氨基酸含量测定，表明 江西猕猴桃属植物在果实形状、毛被状况、果皮色泽、果肉色泽、果实风味、果 实Vc含量及氨基酸含量方面存在丰富的多样性。 (4)对江西猕猴桃属植物中的矮型(赣猕5号)和耐贮(97—3)中华猕猴桃特异 种质资源进行了初步研究，为其保存与利用奠定基础。 2猕猴桃属植物的AFLP分析 cTAB常规法、SDS常规法均适于提取猕猴桃嫩叶基因组DNA。经综合对比分析， 认为CTAB区室法为猕猴桃属植物AFLP分析的最佳方法，其步骤简单、快捷，抽 提的基因组DNA降解少、杂质含量少，能获得高质量的DNA模板。通过对所得到 的DNA模板进行AFLP分析，获得了清晰的DNA指纹图谱。 (2)从AFLP试剂盒所提供的64对引物组合中筛选出扩增带信号强度一致性 物共得到扩增位点190个，其中多态性位点179个，多态性比例为94．2％，区分 率达lOo％。该4对引物适用于猕猴桃属植物的AFLP分析。各种质的多态性带数 存在差异，多态性带数最多的是黑蕊猕猴桃(108条)，多态性比例为60．3％；多 态性带数最少的是早鲜猕猴桃(54条)，其多态性比例为30．2％。结果进一步显示， 猕猴桃属植物在DNA分子水平上存在丰富的遗传多样性。 (3)首次运用”LP技术构建了31份猕猴桃种质的DNA指纹图谱，通过对扩 较远。依相似系数0．56的水平，将供试的31份猕猴桃种质分为4个类群：净果 组和斑果组为一类群，糙毛组为一类群，星毛组为一类群，中华猕猴桃和美味猕 猴桃为一类群，该结果与传统的果面毛被特征和皮孔状况的形态分类系统中组的 划分大体一致，并有按地理分布聚类的趋势。AFLP的分子分类可弥补传统形态 分类系统的不足，其分类范围更细，可为猕猴桃属植物的分类提供依据。 (4)聚类分析表明，猕猴桃属植物矮型种质“赣猕5号”独立于中华猕猴桃 种，基于AFLP指纹，从分子水平上分析，可提升为猕猴桃属中华猕猴桃种内的 一个变型。 3猕猴桃种质超低温保存研究 ． o 与MS+BAlo+NA-A0I较适于猕猴桃外植体的诱导及增殖。无菌小芽在MS+IBAl 培养基上出根率较高，根系生长正常。 (2)猕猴桃的组培苗每4周继代一次，在增殖培养基上连续继代3～5次后转 入到低浓度生长调节剂的培养基上继代一次，然后继续增殖。生根试管苗经炼苗 移栽后可达到91％的成活率。 (3)首次采用玻璃化法保存了猕猴桃种质离体茎尖，其适宜的程序为：继代 Ⅱ 室温下用2mol