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美洲南瓜(cuurbit pepo)wmv-2抗性遗传及分子标记研究
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目 录
中文摘要………………………………………………………………………………………I
英文摘要………………………………………………………………………………………III
l前言……………………………………………………………………………………………………………………l
1．1南瓜病毒病的研究………………………………………………………………………………………．．1
1．1．1南瓜作物病毒病的发生及症状……………………………………………………。l
1．1．2侵染南瓜的病毒病病原种类………………………………………………………．1
1．1．3南瓜病毒病的病原鉴定………………………………………………………………．2
1．1．4南瓜病毒病的抗性遗传规律的研究………………………………………………．4
1．2南瓜作物抗病毒病育种方法………………………………………………………………．5
1．2．1南瓜作物抗病毒病传统杂交育种…………………………………………………5
1．2．2南瓜作物抗病毒病分子生物育种…………………………………………………5
1．3抗病育种中遗传标记的应用……………………………………………………………．6
1．3．1形态学标记……………………………………………………………………………………6
1．3．2细胞学标记……………………………………………………………………………………7
1．3．3生化标记…………………………………………………………………………………．7
1．3．4分子标记…………………………………………………………………………………8
1．4分子标记辅助选择在抗病毒病育种中的应用…………………………………………。13
1．5研究的目的与意义………………………………………………………………………………．14
1．6技术路线形态学标记…………………………………………………………………15
2材料与方法………………………………………………………………………………………．．16
2．1试验材料……………………………………………………………………………………………16
2．2南瓜对WMV-2的抗性鉴定……………………………………………………………．16
2．2．1病毒样品的RT-PCR检测……………………………………………………………………．17
2．2．2病毒样品的CP基因克隆…………………………………………………………………．20
2．2．3病情调查及分级标准……………………………………………………………………．20
2．2．4抗病性的评定标准…………………………………………………………………20
2．3南瓜抗WMV-2基因的SSR分子标记筛选……………………………………………………20
2．3．1试验试剂及仪器………………………………………………………………………．21
2．3．2引物来源……………………………………………………………………………………．2I
2．3．3南瓜基因组的DNA提取……………………………………………………………………。22
2．3．4DNA的定量检测…………………………………………………………………………．22
2．3．5抗病基因池(B1)和感病基因池(B2)的建立……………………………………．22
2．3．6
PCR反应体系……………………………………．．．……………………………………．．23
2．3．7PCR反应程序………………………………………………………………………………23
I
东北农业大学农学硕七学位论文
2．3．8扩增产物的变性处理……………………………………………………………23
2．3．9聚丙烯酰胺凝胶电泳……………………………………………………………．24
2．3．10数据统计与分析………………………………………………………………．．26
3结果与分析……………………………………………
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