杧果ISSR标及其优良单株的早期鉴定.pdfVIP

杜果lSSR标记及优良单株早期鉴定 摘要 杜果是世界五大热带水果之一．也是我国著名的热带水果。为了弄清我 国杜果主栽品种及地方品种的亲缘关系，探索早期快速鉴定优良单株的方 法。本论文选用一种简便、快速、可靠的分子标记一一ISSR技术，探讨其 在杜果的亲缘关系、遗传多样性、品种鉴定以及在杜果炭疽病和生理病害 早期鉴定中的应用。主要研究结果如下： 1、改良了杜果基因组DNA的提取方法，提取出的丰亡果基因组DNA质量 高，适合于lSSR扩增；叶绿体DNA的提取是采用先提取叶绿体，再经过蔗 度的叶绿体DNA。 2、优化了适于杜果属植物lSSR扩增的反应体系和反应程序：总体积 Tri 20uL，10frlmol／L s—HCI(pH8．3)．50mmoI／LKCI．1．5mmoI／LMgCI2． 0．2mmol／L umoI／L Ur dNTP．0．25 primer，1Taq BiotechnoIogy，Japan)．60ngDNA。扩增反应的程序：94℃5min预变性： 94、c 47 1m．nt 4C一53℃(叶绿体DNA是50。C-55℃)lrn；n，72℃2min，40 mi 个循环：72℃延伸10n。 3、从1 20条lSSR引物中筛选出20条条带清晰、多态性丰富的引物用 增的引物，其中有7条是基因组DNA和叶绿体DNA共有的引物。 用于区分吕宋杜品种(系)。分析DNA指纹图谱，发现这6个引物中每个引 物都能区分吕宋系列品种(系)，吕宋杜和其它供试的7个品种(系)同源 性低，而这7个品种(系)：高州吕宋杜、湛江吕宋柁、田阳香丰亡、金钱杜、 柳州吕宋杜、粤西一号、攀西红吕宋同源性较高，可归为一类。表明ISSR --PCR技术对杜果品种(系)的鉴定非常有效，能区分亲缘关系很近的品种 (系)。 5、以38个杜果栽培种、扁桃、冬柁为试材，并从42个ISSR引物中 筛选出9个多态性好的引物进行ISSR--PCR研究，聚类分析发现所有供试 的23个广西地方品种与秋丰亡、马切苏杜、象牙杜和爱文柁归为一个大类， 而且广西本地杜果品种之间的亲缘关系较近。 6、对广西农科院果树赍源圊的33个杜果品种和2个近缘种扁桃、冬 杜分别进行基因组DNA和叶绿体DNA ISSR分析。选出多态性好的7个lSSR 共有引物，用UPGMA进行聚类分析，若以0．73为相似系数分界点，叶绿体 DNA l I 类。虽然叶绿体DNASSR比基因组DNA SSR扩增的条带数少，但是它 的多态性比率却高于基因组ISSR(79．4％VS 70．7％)。在杜果亲缘关系分 析上，叶绿体DNAISSR分析优于基因组DNAISSR分析。 引物，对20个丰亡果样品进行ISSR--PCR研究，探讨其与果实生理病害关系。 结果表明：20个杜果品种聚类为两组，8个患果实生理病害的品种聚类为 一组，12个不表现果实生理病害的品种聚类为另一组。根据这一结果，可 利用这9条引物对孝亡果品种是否易患生理病害进行早期初步鉴定。 的引物，对台农一号、水英达、爱文、海顿等20个柁果品种进行炭疽病抗 病性分析，结果显示ISS--PCR聚类关系与杜果炭疽病的抗性有很大的相关 性，表明ISSR技术可作为早期鉴定杜果炭疽病抗性的一种方法 关键词：丰亡果分子标记ISSR生理病害炭疽病 STUDYONISSR ANDITS NLU凇RoFN【ANGo APPUCj钢【’IoNINEARIIYIDENTIFIC』钢[10NOF EUTEⅣL气NGoPI。ANT indicaL1isoneofthefivemain