柑橘黄龙病的茎微芽嫁接脱毒及其PCR检测的研究.pdf

缩略词表 6．BA 6-Benzyladenine 6．苄基腺嘌呤 BLO Bacteria．1ike 柑橘黄龙病病原 Organism Virus CEV CitrusExocortis 柑橘衰退病 Bromid C1’AB 十六烷基三甲基溴化胺 CetyltrimethylammorIium Virus Crv citmsTristeza 柑橘裂皮病 EB EhtidiumBromide 溴化乙锭 Acid 赤霉素 GA3 Gibberellic IBA 3-IndoleAcid 吲哚乙酸 Butytic MT andTucker MT基本培养基 Murashige NAA Acid 萘乙酸 q-Naphthylacetic Reaction 聚合酶链式反应 PCR Chain Polymerase STG Shoot．tipGrafting 茎尖嫁接 3 摘 要 本实验于2002年10月至2004年3月在华中农业大学国家果树脱毒种质资源室 内保存中心进行，取带毒和健康的不同柑橘品种的茎尖为试材，进行微芽嫁接。并 对带毒材料和嫁接成活植株进行聚合酶链式反应(PCR)、直接荧光检测。为果树 脱毒中心建立了柑橘茎尖嫁接获得无病毒苗木的培养体系。主要的结果如下： 1．通过改进的方法提高了茎尖嫁接成活率， “上”法最高的成活率只有37．5％， 而改进方法的最高成活率为75％。 2．用不同浓度的6一BA对茎尖进行不同时间的处理，不同的品种对6一BA的效果 率，较高的可达75％。 3．用不同浓度的GA3对茎尖进行不同时间的处理，不同的品种对GA3的效果不一 致。发现2me．／L的GA3浸泡茎尖20rain时有利于提高3个品种的嫁接成活率， 较高的成活率为62．5％。 4．根据黄龙病病原的核苷酸序列设计PCR引物。脱毒前利用PCR对感病的红江橙、 宫川和纽荷尔进行检测。结果红江橙、宫)ll平n纽荷尔都扩增到特异性电泳区带， 这与设计的扩增片断一致，证明是感染黄龙病病原的植株。 5．感染黄龙病的植株筛管细胞中异常荧光是由～群坏死细胞引起的，用直接荧光 法作为检测的辅助方法。在荧光显微镜下观察到病株韧皮部有黄绿色荧光团块。 6．对嫁接成活苗进行了PCR、直接荧光法检测，都未检测到黄龙病的病原，说明 茎尖嫁接脱除黄龙病病原是有效的，所得到的成活苗