脉动流对血管平肌细胞相关基因表达的影响及机制探讨.pdfVIP

y 530088 脉动流对血管平滑肌细胞相关基因表达 的影响及机制探讨‘ 生物医学工程学专业 研究生 田佳 导师 陈君楷樊靖波 教授 摘 要 目的 探讨人体脐动脉平滑肌细胞(Humanumbilicalsmooth artery muscle celis。HUASMCs)的生物学特性，并建立人脐动脉血管平滑肌细胞原代、 传代培养的最佳方法；采用寡聚核苷酸微阵列技术研究脉动流切应力对人体动 脉平滑肌细胞基因表达影响，以及相关基因表达的调控；比较脉动流和定常流 两种剪切应力作用下血管平滑肌细胞(VS～iC)的基因表达的差异。 方法(1)选择体强培养的人体脐动脉平滑肌细胞第2—3代为本实验研究 对象，常规免疫组化法鉴定动脉血管平滑肌细胞的Q一肌动蛋白，DAB显色。将 细胞悬液种植于处理过的玻片上，细胞贴壁后，加入10％颞生小牛血清的嗍EM 培养基，再移入3712、5％C0。的恒温孵育箱中静置培养。待平滑肌细胞长满融合 后，立即进行流体剪切应力试验。选择近生理状态下的脉动流(平均切应力为 5．52 h。以同样条件下定 dyne／cm2)，脉动频率为I．25Hz，切应力作用时间为6 常漉切应力(5．52dyne／cm’。时间为6h)处理的血管平滑肌细胞为对照，以 未傲任向。处理的血管平滑肌细胞为阴性对照。(2)提取细胞总RNA，逆转录合成 单链cDNA，双链cDNA，体夕}转录合成生物索标记的cDNA与基因进行芯片杂交， Lumonics)进行基因芯片的 System(GSI ScanArray“MicroarrayAnalysis software Analysis ExpressdataTM)完成数据分析。 LTD．Microarray 结果(1)经Q一肌动蛋白鉴定，组织块贴壁法可获得高纯度的HUASMCs。 ·国家自然科学基金重点资助项目(NO 教育部跨世纪优秀人才计划 1 原代培养的iIUASMCs 1～4代细胞增殖能力强、生长旺盛，此后细胞的增殖能力 逐渐降低，到第10代几乎丧失增殖力。原代培养以MCDBl31为最佳培养基。(2) h 经脉动流切应力(5．52dyne／cm2，频率为1．25Hz)作用血管平滑肌细胞6 后对基因芯片扫描结果进行分析发现，有1330个基因出现差异表达，约占基 因芯片上基因总数的10．39％，其中669个表达显著增加，661个表达显著降低； h后对基因芯片 (3)经定常流切应力(5．52dyne／cm2)作用血管平滑肌细胞6 800个基因中有2676个基因出现差异表达，约 扫描结果进行分析发现，在12 占基因芯片上基因总数的20．91％，其中1660个表达显著增加，1016个表达 显著降低；(5)分别经定常流和脉动流体切应力处理的血管平滑胍细胞基因表 达差异比较，比值大于2的上调基因有1419个，小于0．5的下调基因有878个。 这些表达差异的基因有细胞因子和受体、转录相关基因、生长分化基因、调亡 相关基因、信号传导相关基因、细胞周期相关基因、电子传递和氧化相关基因、 转移酶相关基因和癌症相