茶树叶糖蛋白的化研究.pdfVIP

摘 要 糖蛋白是生物体内一类重要的具有生物信息与结构功能的大分子。另 外，许多天然植物糖蛋白本身就是很好的药物，具有降血糖、增强免疫、消 炎、抗肿瘤等功效，以糖蛋白为基础的重组蛋白药物在临床I：也早巳应用。 茶树I叶中糖蛋白是茶叶多糖的主要活性成分，而茶叶多糖对治疗人体的糖尿 病等保健功效早为人们所认同。 本文以茶树叶为试材，做了茶树叶糖蛋白的提取、分离、攀定、纯化的 研究。比较了不同的缓冲液种类、不同pH条件下茶树叶总蛋白提取的效果， 采用丙酮粉加PVPP提取方法、BufferA为提取缓冲液，提取茶树nt‘总蛋白。 从茶树叶总蛋白中分离糖蛋白，用不同饱和度的硫酸铵分四级沉淀茶树 叶总蛋白，分别为O一20、20 40、40一60、60一80。各分级蛋白进行Sephadex G．100凝胶过滤，使分级蛋白中的蛋白质按其分子量的大小先后洗脱，从每 个分缴蛋白凝胶过滤的收集液中，鉴定了条树叶糖蛋白。 茶树叶糖蛋白的鉴定采用凝胶过滤法初步定性签定和SDS—PAGE、胶 上糖蛋白染色法。根据收集管中洗脱液的280nm蛋白吸收峰与苯酚一硫酸法 测定的糖量趋势是否‘致，初步定性鉴定出两个区域的收集管中有糖蛋白。 再从各收集管的收集液q1，用三氯乙酸沉淀蛋向法、冷丙酮沉淀蛋白法相结 合浓缩、制备蛋白样品，进行SDS—PAGE，刘SDS胶进行PAS糖链染色鉴 定糖蛋白，并从茶树叶分级蛋广]中准确地鉴定出两个区域的收集管中含有多 种糖蛋白。 糖蛋白的纯化选择了柏同样品、相同的电泳条件，用考马氏蓝染色、糖 蚩白试剂盒染色，分别对同…糟蛋白样品对照鉴定，用蛋白质的被动扩散回 收法，成功地从SDS胶上快速地纯化多种条树叶糖肤。从SDS胶上纯化的 茶树叶糖肽鉴定结果看，茶树叶糖蛋白的SDS胶上纯化回收率达50％左右。 用SDS胶上快速纯化法f二次纯化的糖蛋白量足够用于糖蛋白的质谱、液相色 谱、氨基酸测序、糖链结构、蛋白特性等方面的研究。 为了纯化天然糖蛋白，进行了茶树叶糖蛋白的ConA—Sepharose413亲和 G一100凝胶过滤收集的莘只糖蛋白中，分离茶树叶糖蛋白。 层析，从Sephadex 4B亲和层析的茶树 糖蛋白染色鉴定试剂盒鉴定结果表明：ConA—Sepharose 叶蛋白是糖蛋白，在SDS胶上出现了两条糖蛋白带，其分子量分别为63000 和54000。 关键词 茶树 叶糖蛋白 提取 鉴定 纯化 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 Abstract ofbiomacromoleculesthat rolesinthe isone playimportant Glycoprotein andthestructurein bioinformation organism．Additionally，manyglycoproteins in fromnatural areinthemselveseffectivemedications plants depressing and inflammation immunologicalfunction，combating blood—glucose，enhancing tumor have been inclinic repellingeIc．Glycotec