荞麦球蛋白酶法解制备抗氧化活性肽的研究.pdfVIP

摘 要 对荞麦球蛋白进行酶解，以酶解液对O；的清除率和水解度(DH％)为指标， 筛选出适合酶解养麦球蛋白的蛋白酶，进一步研究蛋白酶的加酶量、底物浓度、温 度、pH、水解时间对荞麦球蛋白的酶解效果，并采用正交试验优化其工艺条件。对 G．25凝胶柱层析分离，并对其各分离组分清除O；、·OH和 酶解产物进行Sephadex DPPH·的能力及分子量分布进行了研究。对具有较强抗氧化活性的分离组分IⅡ，进 一步分析了其对H202所致小鼠红细胞溶血的抑制作用并确定了其氨基酸组成。 实验结果显示：采用碱性蛋白酶水解养麦球蛋白效果优于胰蛋白酶和木瓜蛋白 酶；最佳工艺条件为：加酶量20000 U／g，温度55℃，pH值9，底物浓度5％，反 应时间2h；经柱层析分离得到的分子量小于1000Da的组分IⅡ显示了较强的抗氧化 能力，其清除o；、·OH与DPPH·的IC50分别为0．75 mg／mL、0．897mg／mL和0．38 mg／mL，高于分子量较大的组分I和未经分离的荞麦球蛋白酶解液：分离组分IⅡ可 以显著抑制H202引发的小鼠红细胞膜的溶血反应，其中终浓度为1．578mg／mL的分 离组分m对红细胞溶血抑制率达47．37％；氨基酸含量分析结果表明，分离组分Ⅲ中 谷氨酸含量最高，胱氨酸含量最低，精氨酸、甘氨酸、赖氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸 含量较高。 关键词：荞麦；球蛋白；酶解；活性肽；抗氧化 frombuckwheat on ofantioxidant preparation peptides Study enzymehydrolysis globulinby Abstract ofO；and of criterion,the Takingscavengingactivity degreehydrolySis(DH％)as ofthe ofbuckwheatwasstudied．Effects enzyme Oobulm rightproteolytichydrolysis of of timeon hydrolysis d0啦eprotease，thedensitysubstratum，temperature，pH,reaction were conditionsweredetermined ofbuckwheatGlobulin the studied,and by optimum was G一25 filtration by gel orthogonalexperiment．ThehydrolyzateseparatedSephadex