西北医科大生物化学复制转录翻译创新.ppt

中心法则： DNA的生物合成 复制(replication)： 以母链DNA为模板合成子链DNA的过程。 半保留复制 (semi-conservative replication) 双向复制 (bidirectional replication) 半不连续复制 (semi-discontinuous replication) 方向性和高保真性 一、半保留复制的实验依据和意义 原核生物： ? 基因组是环状DNA ? 只有一个复制起始点 复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸相反的复制叉，称为双向复制。 复制时双链打开，分开成两股，各自作为模板，子链沿模板延长所形成的Y字形的结构称为复制叉(replication fork) 。 在原核生物双向复制中，DNA被描述为眼睛状。为说明方便而做的图为?形。 　 真核生物： ? 染色体DNA有多个复制起始点。 ? 复制子是独立完成复制的功能单位。 真核生物多个复制起始点、复制子与复制叉 领头链：以3’→5’方向的亲代DNA链作模板的子代链在复制时基本上是连续进行的，其子代链的聚合方向为5’→3’，这一条链被称为领头链。 随从链：以5’→3’方向的亲代DNA链为模板的子代链在复制时则是不连续的，其链的聚合方向也是5’→3’，这条链被称为随从链。 半不连续性：领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。 冈崎片段： ? 1968年日本生化学者冈崎用电镜及放射自显影技术，观察到DNA复制中出现一些不连续的片段，将这些不连续的片段称为冈崎片段。 ? 原核生物: 1000~2000个核苷酸 ? 真核生物: 100~200个核苷酸 DNA复制的体系 底物: dNTP (dATP、dGTP 、dCTP 、dTTP) 聚合酶: 依赖DNA的DNA聚合酶(DNA-pol) 模板: 解开成单链的DNA母链 引物: 提供3-OH末端的寡核苷酸 其他酶和蛋白质因子: 拓扑异构酶、解螺旋酶、单链DNA结合蛋白、引物酶、连接酶 聚合反应的特点 DNA 新链生成需引物和模板； 新链的延长只可沿5? → 3?方向进行 。 二、DNA聚合酶 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase) 简称：DNA-pol 1959 年获诺贝尔生理学或医学奖 聚合反应机理 聚合反应的特点 ? 以单链DNA为模板 ? 以dNTP为原料 ? 引物提供3-OH ? 聚合方向为5 →3 ? 遵守碱基互补规律 （一）原核生物的DNA聚合酶 ? DNA-pol Ⅰ ? DNA-pol Ⅱ ? DNA-pol Ⅲ DNA聚合酶II (DNA-pol II) ? 具有5′→3′的聚合酶活性。 ? 只是在无polⅠ及polⅢ的情况下暂时 起作用。 ? 对模板的特异性不高, 参与DNA损伤 的应急状态修复。 （一）DNA-pol的核酸外切酶活性和即时校读 （二）复制的保真性和碱基选择 ? DNA聚合酶靠其大分子结构协调非共价（氢键）与共价（磷酸二酯键）键的有序形成。 ? 嘌呤的化学结构能形成顺式和反式构型，与相应的嘧啶形成氢键配对，嘌呤应处于反式构型。 单链DNA结合蛋白 (single stranded DNA binding protein, SSB) 在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整性。 引物酶(primase) 依赖DNA的RNA聚合酶。 对利福平不敏感。 可以催化游离NTP聚合。 在大肠杆菌，是dna G 基因的表达产物。 催化RNA引物的生成。 解决方法： 在解链酶、拓扑异构酶作用下，DNA双链解开，单链结合蛋白固定解开的单链，形成复制点 (又称复制叉)；引物酶催化合成RNA引物。 DNA解成单链 由拓扑异构酶松弛超螺旋，解螺旋酶 解开双链，SSB结合到单链上使其稳定。 ? 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及