产淀粉酶芽孢杆菌的分离筛选与发酵.pptVIP

实验中用到的仪器工具 接种工具：枪头、接种针、接种环 基本仪器：培养皿、试管、移液管、烧杯量筒、电炉、涂布器、玻璃棒、试管、架滴管等。 大的仪器：摇床、保温箱、灭菌锅、超净台。 注意结果与讨论 产淀粉酶芽孢杆菌的分离筛选及发酵 制药工程系 食品1102班 第四大组 淀粉培养基： 项目名称 1产淀粉酶杆菌的初筛 2产淀粉酶杆菌的复筛 3目的菌株的保藏 4发酵及控制 种子的扩大培养 培养基的制备 发酵系统灭菌 接种 发酵 初筛准备 取土样地址：乐购后边和柯南派出所附近。 将涂布器、试管、无菌液试管、移液管、培养皿、配置好的培养基放入灭菌锅灭菌。 初筛方案 制备土壤悬液：取土壤（地表皮3—5cm以下的）5g、无菌水45ml、玻璃珠放入干净的锥形瓶中，震荡摇匀10min（），在85℃的水浴中加热15min，成为10的负一次方的土壤悬液。放入摇床摇匀。同时准备培养基。 梯度稀释：从制备好的土壤悬液中取出1ml放入标记好的无菌水试管①得到十的负2方的土壤悬液。并依次从试管①②③取1ml放入试管②③④，震荡混匀，准备放入培养基。 涂布培养：在②③④试管中分别取出0.1ml分别加到标记号的培养基ⅠⅡⅢ中并作平行试验ⅣⅤⅥ。用涂布器涂布，放入保温箱中恒温培养。（黄甜甜，赵云） 分区划线 将事先准备好的仪器、培养基、和ⅠⅡ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ这些长出菌落的培养皿放在超净台中（选出ⅠⅡ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ中的长势良好的单菌落⑴⑵⒃⑾~⑿⒀⒁并用记号笔记录），由杨悦、李会娟用枪头蘸取⑴⑵⒃⑾~⑿⒀⒁对其进行分区划线abcdefghigk，并作平行试验。 透明圈 做完分区划线后将ⅠⅡ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ分滴加碘液，随即观察透明圈的大小，并量取后做记录。 点接法 将事先准备好的仪器、培养基、和abcdefghigk这些长出菌落的培养皿放在超净台中，由师莉露和杜婷婷用枪头蘸取abcdefghigk中长势良好（划线法中较好的菌株后代）*****进行点接接种，并作平行试验。 透明圈 做完分区划线后将abcdefghigk滴加碘液，随即观察透明圈的大小，并量取后做记录。 制作涂布器 工具：酒精喷灯、酒精、玻璃棒、夹子、火柴、湿抹布。 制作方法：在酒精喷灯的凹槽处倒入少许酒精，用火柴点燃，对喷灯内酒精进行预热。当喷灯内的酒精喷出时点燃，调节右手处的小金属杆控制火焰大小，把玻璃棒放在喷灯口出进行灼烧，一边用夹子夹成涂布器的形状。完成后用抹布扑灭酒精喷灯。 制作要求：涂布器的前端烧成等边三角形，且不宜过大。后边不要太长，与前端形成20℃~30℃夹角。 只做好的图样： 关于芽孢的形态 营养体阶段 芽孢体阶段（着生位置不同）端生~~~ 芽孢 革兰氏染色和芽孢染色 革兰氏染色：点燃酒精的，涂片（在载玻片上滴加少量蒸馏无菌水） 干燥 固定（在酒精灯上快速过几次） 草酸铵结晶紫初染（1~2min） 水洗 卢戈碘液媒染（使结晶紫固定） 脱色（酒精） 水洗（立即） 翻红复染 镜检 得出 G﹢ 是革兰氏阳性 （红色）； 结论 G﹣是革兰氏阴性（蓝紫色）。 涂片要均匀干燥；媒染1min；酒精用95％的；脱色后立即水洗。 芽孢染色：点燃酒精的，涂片（在载玻片上滴加少量蒸馏无菌水） 干燥 固定（在酒精灯上快速过几次） 5％孔雀绿染液初染（1~2min） 水洗 卢戈碘液媒染（使结晶紫固定） 脱色（酒精） 水洗（立即） 翻红复染 镜检 使用显微镜注意事项 用完油镜后，用擦镜纸先把物镜上的油擦去，接着用沾取乙醇的擦镜纸擦一遍物镜，最后再用擦镜纸擦一遍物镜。 准备复筛 准备培养基（不加琼脂800ml） 实验仪器：12个锥形瓶8个移液管等。 锥形瓶4个 锥形瓶4个（平行4个） 复筛：半定量﹑定量 所用仪器：EP管（将X个干净的EP管放入小烧杯中，报纸包好）﹑培养皿﹑移液管﹑牛津杯（将16个牛津杯放入底部垫有两张滤纸上边垫有一张滤纸的培养皿中，用报纸包好）﹑枪头（烘干）﹑膜过滤器（中间垫有过滤膜）。 所用检测培养基：2g淀粉溶于1000ml的蒸馏水中，加2％的琼脂，调节PH至7.2。 半定量：平板扩散法，培养到一定阶段后，锥形瓶中既有培养液又有菌体还有具有活性的酶，所以提纯产物酶时不能通过高温的方法灭菌，否则就会使酶失