组蛋白去乙酰化酶抑制减轻急性移植物抗宿主病的实验研究.pdf

摘要 摘要 目的 通过建立小鼠急性移植物抗宿主病(Acuteversushostdisease，aGVHD) graft 模型，采用流式细胞术、实时定量PCR、ELISA、病理学等方法，研究组蛋白去 乙酰化酶抑制剂(Histione deacetylase 响及免疫调节作用，探讨HADCI减轻GVHD的分子生物学机制。 方法 线加速器总剂量6．0Gy全身照射(TBI)受鼠后，尾静脉联合输注供鼠的新鲜脾脏 单个核细胞(1。8×106)、骨髓单个核细胞(1．6x106)悬液建立小鼠aGVHD模型。 移植后小鼠随机分为两组：SAHA治疗组：腹腔注射SAHA 359／kg／次，d3，5，7， 9，1l；DMSO对照组：腹腔注射DMSO剂量350la Vkg／次，d3，5，7，9，11。 2、观察SAHA治疗组与DMSO对照组小鼠aGVHD的发生率、临床表现及 生存时间；移植后+2d、+4d、+7d行小鼠外周血白细胞计数检测造血重建，+15 天PCR扩增外周血基因组Y染色体检测骨髓植入是否成功；取濒死或实验终点小 鼠的肝、脾、小肠组织，行病理学检测。 3、流式细胞术每周检测SAHA治疗组与DMSO对照组小鼠外周血 测SAHA治疗组与DMSO对照组小鼠Foxp3mRNA的相对表达量，采用溶解曲 线和琼脂糖电泳鉴定PCR产物特异性。 4、ELISA试剂盒检测SAHA治疗组与DMSO对照组小鼠外周血细胞因子 白细胞介素一2(Interleukin一2，IL-2)及转化生长因子一B l(Transforminggrowth factor 131，TGF—p1)。 5、统计学处理：数据统计分析采用SPSS13．0统计软件包进行处理，实验所 ANOVA统计 得数据以均数士标准差(x--eSD)表示，多组间比较采用One．way 方法分析，移植后外周血林白细胞亚群变化采用重复测量统计分析，组间比较采 摘要 对照组的Foxp3基因表达变化差异进行统计分析。一个因变量与多个自变量间的 线性数量关系用linear regression进行逐步回归统计分析。P(0．05为差异具有统 计学意义。 结果 鲜脾脏、骨髓单个核细胞悬液后，移植后+7dWBC均大于1．O×lO札，提示造血 SAHA治疗组与DMSO对照组外周血PCR产物中均能检测到供鼠Y染色体，提 示供鼠骨髓细胞在受体内植入成功。 2、SAHA治疗组较对照组小鼠出现aGVHD时间推迟，程度减轻、生存时 间延长。SAHA治疗组生存率与DMSO对照组相比，差异具有显著性(P0．05)： 疗组与DMSo对照组差异无显著性(P0．05)，移植后第二周、第三周、第四周 照组病变较为严重。提示SAHA能有效减轻GVHD的临床表现及严重程度。 分率随时间呈逐渐递减趋势。移植后+7d SAHA 细胞比例与DMSO对照组差异无显著性(PO．05)；移植后+14d、+21d 照组明显升高，差异具有显著性(PO．01)。 4、移植后+12d，SAHA治疗组IL一2水平显著低于DMSO对照组水平，差 异具有显著性(PO．01)。 结论 Ⅱ 摘要 鼠经6．0Gy全身照射后，输注异基因供鼠脾脏、骨髓单个核细胞，可以诱导出 MHC不相合的造血干细胞移植后aGVHD小鼠模型； 2．SAHA可延迟aGVHD的发生，减轻aGVHD的严重程度； 前炎症因子的瀑布效应，增强了免疫抑制效应，减轻各器官脏器的免疫攻击效应， 从而在一定