水稻LOC-Os01g74370和LOC-Os01g42200基因的克隆及功能研究.pdfVIP

水稻LOC_OsOi974370和LOCO因的克隆及功能研究 摘要 干旱、高盐和病虫害等逆境胁迫严重影响了水稻的生长发育和产量。为了保 障粮食安全，改善和提高水稻对环境胁迫的抗性一直是农业生产的主要目标之 一。随着植物分子生物学的发展，发掘抗逆相关新基因对提高水稻的抗逆性具有 重要意义。 水稻基因LOC 编码一个具有DUF966 O．。白蛋能功知未的域构结 量PCR分析该基因在检测的水稻各个组织中均有表达，其中在愈伤组织中的表 达量最高。荧光定量PCR分析干旱、高盐、SA、机械损伤和细菌性条斑病菌侵 染等均能诱导基因LOC 0表达，ABA可抑制其表达。此外基因上 游的1Kbp启动子区包含许多逆境响应元件包括干旱、病原菌、ABA、冷胁迫 等元件，因此初步推测这个基因与水稻抗逆有关。为了更好地研究它的功能，本 实验通过RT-PCR技术克隆了该基因，然后采用Gateway克隆技术构建了相应 的植物过量表达载体pH7WG2一LOC 2(II)一LOCONAi。通过农杆菌介导的转化方法将表达载体转化到野 生型水稻中，共获得了19株过量株系和6株干扰株系。19株过量株系经PCR 检测确认目的基因已整合到水稻基因组中，然后通过荧光定量PCR检测了其 RNA转录水平，基因LOC OT0代和T1代过量株系中均得到了稳 定的高水平表达。进一步检测了上述过量株系中防御相关基因NPR、CHS、擞J a、PAL、擞5、PAD4的表达情况，其中朋5在基因LOC 0T0代 T0代和Tl代过量株系中均呈现下调表达趋势。综上所述，基因LOC．Os019743 70可能参与植物防御反应如干旱胁迫、盐胁迫、还有病虫害胁迫响应，为更深 入研究该基因功能奠定了良好基础。6株干扰植株经荧光定量PCR分析基因 LOC O没有达到预期的干扰效果。 基因LOC O是一个功能未知基因，开放阅读框为504bp，编码 167个氨基酸。该基因在水稻各个组织均有表达，其中在茎中表达量最高。干旱、 高盐胁迫均能诱导该基因表达。基因上游的lKbp启动子区包括一些干旱胁迫和 水稻LOC_OsOl974370和LOC_OsOl942200基因的克隆及功能研究 水胁迫响应元件，暗示这个基因可能与水稻抗逆有关。同样通过RT-PCR克隆基 通过农杆菌介导的方法将这两个载体分别转化到水稻中获得了6株干扰植株，并 没有达到预期的干扰效果。 关键词：LOC OLOC_O转基因；抗逆 2 水稻LOC_OLOC_O因的克隆及功能研究 Abstract Environmental as and stress，such drought，saltplantdisease，frequently rice and to influences orderensurefood the growthyield．In security,improving resistanceofficetostresshasbeenoneofthemain of pointsagricultural production．