一步法RT-PCR扩增PRSV海南分离物全长基因组cDNA.pdfVIP

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2016-01-31 发布于安徽
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一步法RT-PCR扩增PRSV海南分离物全长基因组cDNA.pdf

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一步法RT-PCR扩增PRSV海南分离物全长基因组cDNA.pdf

一步法RT-PCR扩增PRSV海南分离物全长基因组cDNA 2 庹德财1’2，沈文涛1，高乐1一，言普1，周鹏k 571101； (1中国热带农业科学院热带生物技术研究所，分析测试中心海i：2 2海南大学农学院海口570228) 【摘要】为了研究番木瓜环斑病病毒海南分离物(PRSVHN一2)的全部核苷酸序列，应用植物总RNA提取试剂盒获得了高纯度的总RNA，使用Oligo 海南分离物全长基因组eDNA。为了验证获得的全长基因组eDNA的正确性，以扩增出的全长eDNA 为模板，将PRSV全长基因组分成A和B两个大片段进行扩增，并应用T载体进行了克隆和测序，测序结果显示，其与国内外报道的PRSV各分离物全长核苷酸序列的相似性很高，表明本文建立的一步法RT—PCR扩增PRSV全长基因组eDNA的方法正确、可行。【关键词】番木瓜环斑病病毒；全长基因组eDNA；克隆与测序 of eDNAof Amplificationfull-lengthPapayaringspot v／rusofHainanstrain TUO Deeai，SHEN Le，YANPu，ZHOU Wen-tao，GAO Peng (1Instituteof Bioseieneeand of Tropical Biotechnology，ChineseAcademyTropicalAgricultural 571 Sciences，CATAS，HaiKou101，China；2ofA酊culture。 College HaiNan 570228，China) University，HaiKou Todeterminethe nucleotideof virusofHainan [Abstraetl dngspot isolate， complete sequencePapaya an WaS to eDNAofPRSETotalRNAwasextracted efficientmethoddevelopedamplifyfull-length by Kit leaves．Thefirststrand and Plantfrom suseeptibh synthesisusingOligo-dT RNApreppure papaya Random WaScarriedout，which AMVReverse eDNA by Transcriptase．Thefull-hngth nine—mers catalyzed and were andcloned ofPRS