蛋白药物用于药物涂层支架地研究.pdf

本研究是以牛血清白蛋白为模型，通过稳定的水相-水相乳液技术 将其制备成多糖玻璃体颗粒，并将多糖玻璃体颗粒分散于聚乳酸的二氯 甲烷和乙酸乙酯（1：1）溶液中，喷涂于316L 不锈钢支架表面制成蛋 白涂层支架，用SEC-HPLC 比较了蛋白涂层支架制备前后蛋白的聚集情 况，并用扫描电镜等对蛋白涂层支架表面进行了表征。将制备的蛋白涂 层支架在水浴摇床以37°C 磷酸盐缓冲液（PBS ）为介质进行体外释放 动力学研究，按规定的时间间隔取样后用 MicroBCA 试剂盒测定，并考 察了控释层厚度，高分子涂层（PLA 、PLGA ），蛋白葡聚糖比例，蛋白 种类等因素对蛋白体外释放的影响。 在对蛋白涂层支架条件有所把握的基础上，本文考察了将具有促血 管生成作用的促红细胞生成素（EPO ）应用于心脏涂层支架的可行性， 建立了EPO 效价检测方法，比较了EPO 涂层前后蛋白聚集情况，并采 用效价检测方法测定了EPO 体外释放动力学。 结果表明蛋白涂层支架在电镜观察下外观圆整，表面光滑，制剂过 程中未产生蛋白聚集，且蛋白担载量高，能从涂层中缓慢释放达 50 天 以上。蛋白释放速度随着控释层的厚度增加而减慢。PLGA 涂层的释放 速度明显较PLA 涂层快。制备多糖玻璃体颗粒时葡聚糖/蛋白的比例越 高，蛋白释放的突释越小。以该法制备的蛋白涂层支架，蛋白的性质不 同对释放行为影响不大。EPO 涂层支架亦能保护EPO 在涂层和释放过程 中的活性，且实现缓释。 稳定的水相-水相乳液技术及其基础上制备的蛋白多糖玻璃体颗粒 应用于心脏支架涂层上，能在有效保护蛋白构象的同时实现蛋白的缓 释，为具有抗再狭窄活性蛋白应用于心脏支架提供了技术平台。 关键词：蛋白，稳定的水相－水相乳液，蛋白多糖玻璃体颗粒，蛋白涂 层支架，促红细胞生成素 APPLICATION OF PROTEINS ON DRUG-ELUTING STENT ABSTRACT Drug-eluting stents have widely been accepted and applied in clinical treatment of atherosclerotic stenosis for its effectiveness in reducing incidence of restenosis after percutaneous coronary intervention. However, the chemical ingredients loaded on the drug-eluting stents currently used in clinics are less selective, thus they do not only suppress the proliferation of smooth muscle cell but aslo inhibit re-endothelialisation of the wounded site, causing delayed healing and in-stent thrombosis. Protein drugs, in general, possess cell-specific functions and may therefore inhibit smooth muscle cell proliferation selectively and/or speed-up re-endotheliasation. Due to this prospective, protein drug-eluting stents have attracted considerable research efforts in recent years, and some promising molecules have been reported. However, due to the fragile and susceptible tertiary structure of proteins, loading these macromolecular drugs onto stent surface of effective amount for sustained release of suffi